| 實驗步驟 |
一、材料
1. 緩沖液及溶液
變性溶液（1.5 mol/L NaCl，0.5 mol/L NaOH）
HCl ( 0.2 mol/L) 應用于 DNA 脫嘌呤
中和緩沖液（1 mol/L Tris ( pH 7.4)，1.5 mol/L NaCl）
中性轉移緩沖液（10X SSC)
6X SSC
6X 蔗糖凝膠上樣緩沖液
SYBR Gold 或溴化乙錠
2. 酶及緩沖液
適當的限制性內切核酸酶
3. 凝膠
用無溴化乙錠的 0.5X TBE 或 1X TAE 配制的 0.7% 的瓊脂糖凝膠
4. 核酸及寡聚核苷酸
DNA 分子標記物
靶 DNA
5. 專用設備
交聯設備（例如 Stratalinker, Stratagene; GS Gene Linker, Bio-Rad), 或者微波爐，或真空爐
玻璃烤盤
玻璃板
尼龍或硝酸纖維素膜
旋轉振蕩平臺
厚的吸水紙（例如，Whatman 3 MM, Schleicher&Schuell GB004, 或 Sigma QuickDraw)
熒光標記的透明尺
重物（400 g )
二、方法
1. 消化 DNA 并根據方案“Southern印跡（毛細管法將 DNA 轉移到膜上）”步驟 1~3 所述凝膠電泳分離 DNA 片段。
2. 凝膠電泳分離 DNA 以后，用溴化乙錠或 SYBR Gold 染色并照相。將一透明熒光尺放在凝膠邊緣以便從照片上根據遷移距離直接讀出 DNA 條帶的大小。在中性條件下準備轉移用的凝膠。
3. 用干凈的解剖刀或切紙機切下兩張每邊都比凝膠大 1~2 mm 的尼龍或硝酸纖維素膜。切下膜的一角，使之與凝膠的切角對應。切 4 張與膜同樣大小的厚吸水紙。
4. 將膜漂浮于盛有去離子水的皿中直到膜從下往上完全浸濕，然后將膜浸入 10 X SSC 中至少 5 min。
5. 每層都用吸管趕走氣泡，尤其是膜與凝膠之間。將一張膜放在兩張潮濕的吸水紙上。將凝膠放在膜上，二者切去的一角對齊。立即將另一張膜放在膠的另一面，然后是兩張潮濕的吸水紙。
6. 將夾在一起的吸水紙、膜以及凝膠放到 5~10 cm 高的一疊紙巾上。上面再放置一疊紙巾。將一塊玻璃板放在紙巾上并用 400 g 重物壓實。
7. 2~4 h 之后，移去吸水紙及紙巾。將凝膠和膜轉移到干燥的吸水紙上，用一支極軟鉛筆或圓珠筆標記凝膠加樣孔的近似位置。
8. 將 DNA 固定于膜上。
9. 直接用探針與固定的 DNA 雜交。
任何不立即用于雜交的膜都應當充分干燥，松弛地包于鋁箔紙或吸水紙中，室溫下最好保存在真空條件。
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