近年來,國內外均發表了與TORCH感染相關的臨床實踐指南,但仍有內容需要加以補充和明確。國內部分專家就TORCH感染篩查、診斷及干預的臨床路徑進行了專題研討,達成共識如下:
(1)不是所有的TORCH病原體都需要孕前或孕期篩查;對圍孕期婦女不需要進行單純皰疹病毒抗體分型檢測,若無臨床癥狀,不需要等待其IgM抗體轉陰再妊娠。
(2)檢測TORCH-IgM、IgG抗體時應采用定量技術,保存檢測過的剩余血清樣本對可能的后續診斷有不可替代的參考價值。
(3)不能依據血清學篩查陽性結果而做出終止妊娠的決定。
(4)重視對巨細胞病毒再次感染的孕期監測。
(5)慎重使用介入性產前診斷技術,在確認孕期TORCH感染的5~7周并可見胎兒影像學異常后,孕18周后采取羊水標本進行病原體DNA或RNA的檢測,可以結合臍血樣本的IgM抗體檢測進行產前診斷;超聲及MRI檢查有助于評估宮內感染的胎兒預后。
(6)注意孕婦和胎兒的弓形蟲感染治療方法不同。
(7)胎兒非免疫性水腫或不明原因胎死宮內的孕婦需要檢測微小病毒B19抗體狀態,對確診貧血的存活胎兒有微小病毒B19宮內感染時,可給予宮內輸血治療。
TORCH感染的臨床常見征象
既往感染
受檢者既往曾有過癥狀明顯的特定病原體感染史(如弓形蟲)或有可靠的血清學檢測結果,如TORCH抗體檢測結果為IgG抗體陽性、IgM抗體陰性,表示受檢者曾經感染過相應的病原體,機體產生了相應抗體。而病原體可以完全被機體清除,也可以在機體內長期潛伏存在(如HSV、CMV等)。
原發性感染
機體第1次受到某種病原體的感染。一般需要在出現感染癥狀前有過可靠的血清學檢測結果確定TORCH抗體基礎狀態為IgG抗體陰性,而癥狀出現后再次檢測相應血清抗體時轉化為IgG抗體陽性,才能診斷為原發性感染。
復發感染
是在宿主免疫功能低下的情況下,潛伏狀態的病毒重新激活所導致的感染。在出現感染癥狀前有可靠的血清學篩查結果確定TORCH抗體基礎狀態為IgG抗體陽性,而在受到感染間隔10~20 d后再次檢測血清抗體, IgG抗體滴度上升4倍以上,IgM抗體可以是陽性或陰性,可以判定為TORCH復發感染。
再次感染
是宿主因暴露于外源性同種新病毒株所引發的感染。對這種情況除血清學檢測結果與復發感染有相同表現之外,還需通過病毒分離和基因測序鑒定為新病毒株才能確認。
IgM抗體假陽性
由于類風濕因子或者血清內其他因素引起的非特異性干擾,可導致出現IgM抗體假陽性結果。如初次檢測結果為IgM抗體陽性、IgG抗體陰性,在15~30 d后再次采取血樣檢測仍然IgM抗體陽性且IgM和IgG抗體的滴度變化不顯著,甚至IgM抗體滴度降至陰性范圍內,就可以認定為初次檢查的IgM抗體為假陽性。但定性檢測方法難以通過滴度變化觀察來鑒別IgM抗體假陽性。
IgM抗體長期攜帶
在極少數受檢者中,無相應的感染癥狀,在IgG抗體陽性的情況下,IgM抗體陽性的檢出時間可長達1年以上。追溯患者病史可了解到感染發生在很久以前,并非近期復發感染。定性檢測方法發現的此種情形需要轉送到參比實驗室進行確證實驗。采用定量檢測復查到IgM和IgG抗體滴度無顯著變化,容易診斷。此種情形不作為影響其他臨床處置的參考依據。
TORCH感染檢測方法
(一)病原體檢測
包括病原體培養、病原體抗原檢測、核酸(DNA或RNA)檢測等。
1.病原體檢測常用方法與評價:
急性感染期,取血液、羊水、尿液、唾液、皰疹液、腦脊液等樣本,進行TORCH病原體培養、抗原檢測、核酸檢測,陽性檢測結果是判斷特定病原體急性感染最直接的證據。這些基于病原體樣本的檢測方法(包括樣本取材)與病原體復制特點、潛伏或定植位置等特性有關。其中,病原體培養和病原體抗原檢測成本高、費時、費力、周期長,且對實驗室及操作人員專業程度要求較高,臨床應用較少;核酸檢測(比如PCR方法)靈敏度高、特異性好,可快速、高通量檢測,是目前臨床病原體檢測的首選方法。由于原發感染和復發感染均可檢測到病原體存在,所以樣本中檢測出病原體不能區分原發感染和復發感染。
2.胎兒宮內感染確診方法:
羊水PCR檢測常用于胎兒宮內感染的診斷,比常規病原體培養方法更敏感、快速和準確。考慮到胎兒發育規律、病原體感染進程以及病原體垂直傳播的特點,為提高病原體的檢出率,針對不同病原體進行羊水穿刺的時間有差異:巨細胞病毒感染通常在孕21周以后,孕婦感染至少6~7周后進行;弓形蟲感染可在孕18~20周以后,孕婦感染至少4周后取羊水樣本檢測;風疹病毒感染可在孕16~20周,孕婦感染至少3~6周后進行羊水檢測。羊水中巨細胞病毒、弓形蟲等病原體核酸檢測,多采用定量PCR方法,有研究顯示,病毒載量越高,胎兒預后相對越差。
(二)血清學檢測
血清學檢測是分析病原體感染后機體內出現的特異性抗體,與個體的免疫功能有關,適合于感染篩查和機體免疫狀態的評估。
1.特異性IgM抗體:
包括IgM抗體特點和IgM抗體檢測的臨床意義。
IgM抗體特點:IgM抗體是病原體感染后機體內出現最早的抗體。IgM抗體分子是一個五聚體,有10個抗原結合表位(Fab),比其他種類的抗體分子具有更高的效價。五聚體結構特點使得IgM易于與有重復決定簇的抗原結合,容易出現交叉反應,可能出現假陽性結果。
IgM抗體檢測的臨床意義:IgM抗體陽性,提示患者可能處于急性感染期。初次感染期間,IgM抗體滴度一般在1~2個月內急劇上升,達到峰值后逐漸降低,大約3~6個月轉陰。但部分人群體內的IgM抗體可以保持較低的滴度水平,并可持續數年。原發感染和復發感染均能產生IgM抗體,因此僅IgM抗體陽性檢測結果不能診斷急性感染,也不能區分原發感染和復發感染。
2.特異性IgG抗體:
包括IgG抗體特點和IgG抗體定量檢測和動態監測的臨床意義。
IgG抗體特點:IgG抗體是血清中含量最多的抗體類型,占人體血清球蛋白含量80%左右。IgG抗體能夠通過胎盤,出生時新生兒體內IgG抗體均來自母體,出生后迅速下降,至7月齡時幾乎完全消失。新生兒在出生后1~3個月內逐漸合成IgG抗體,大約在7歲時達到成人水平。特異性IgG抗體在IgM抗體出現后產生,隨著感染進展,IgG抗體滴度逐步增加達到峰值后進入平臺期,在免疫正常的個體內可以長期存在。
IgG抗體定量檢測和動態監測的臨床意義:IgG抗體的臨床價值主要在于其定量結果。在疑似感染期兩次取樣(間隔2~3周),在同一平臺檢測特異性IgG抗體滴度,如果第2次檢測較第1次檢測的滴度有顯著增加,提示感染。既往基于ELISA方法的研究提示,巨細胞病毒和風疹病毒急性感染期的IgG抗體滴度有4倍以上增加;近年基于定量精準度更高的發光法(化學發光、電化學發光等)發現,兩次IgG抗體滴度變化如果顯著超出實驗室的日間檢測差異,也提示可能為近期急性感染,但需要臨床結合多指標進行綜合判斷。實驗室需要關注的是,由于每個檢測平臺線性范圍有限,超過檢測線性范圍限制時,建議按試劑說明書稀釋后再測,以明確IgG定量結果,只報告大于最大檢測線性值會降低其臨床輔助診斷價值。
3.IgG抗體親和力:
包括IgG抗體親和力特點、檢測方法和臨床意義。
IgG抗體親和力特點及檢測方法:機體感染病原體后,初次免疫應答產生的IgG抗體與抗原結合能力較弱(低親和力抗體),經過數周或數月后,機體產生的IgG與抗原結合能力更強,互補性更好(高親和力抗體),此后高親和力IgG在體內終身存在[18,19]。IgG抗體親和力有多種檢測原理,結果以百分比表示。以變性劑法為例:利用尿素或二乙胺等變性劑處理結合在抗原上的抗體,低親和力的抗體很容易受變性劑的影響而被洗脫掉,高親和力的抗體與相應的抗原結合力強,經過變性劑作用后仍結合在相應的抗原上而未被洗脫,經信號檢測分析,待測樣本的親和力=處理緩沖液孔信號值/對照緩沖液孔信號值×100%。不同試劑對高親和力和低親和力判定范圍不同,應依據試劑盒說明書判斷。
IgG抗體親和力檢測的臨床意義:IgG和IgM抗體同時陽性時,IgG抗體親和力檢測結果可輔助臨床判斷是否為近期原發感染。巨細胞病毒特異性IgG抗體研究顯示,如IgG抗體檢測表現為高親和力,則可排除近18~20周內的原發感染,IgM陽性和IgG低親和力表示原發感染發生在近3個月,敏感度和特異度均大于90%。風疹病毒IgG抗體在不同個體的成熟時間有差異,研究顯示一些個體IgG抗體經過6周即可成熟、表現為高親和力,有些個體風疹IgG抗體成熟需要38周。弓形蟲IgG抗體親和力檢測多以20周或4個月作為親和力判斷的一個臨界時間點。一般而言,IgG抗體高親和力可排除近3~4個月內的原發感染;IgM抗體陽性,同時IgG抗體低親和力,提示可能為近期原發感染。在臨床缺乏IgG抗體基礎數據、不能檢測到血清學轉化情況下,結合IgM抗體檢測和IgG抗體親和力檢測,可顯著提高原發感染的檢測敏感度及特異度至90%以上。需要注意的是,在原發感染之后,特別是藥物治療后,一些個體的IgG抗體低親和力狀態可能持續數月甚至超過1年,所以不能僅憑IgG抗體低親和力結果判斷患者近期的急性感染,應結合IgG抗體定量結果等多項指標進行綜合判斷評估。