TUNEL分析實驗——TUNEL染色的流式細胞計量術分析

懸浮細胞

PBS甲醛檸檬酸鈉溶液

流式細胞計量儀

1. 凋亡誘導之后，200 g 離心 5 分鐘收集 1X10⁶ 懸浮細胞，用冷的 PBS 洗 2 次，重復離心。

2. 用 2 ml 2% 的甲醛 PBS 溶液固定細胞沉淀，室溫下在水平搖床上孵育 30 分鐘。

3. 200 g 離心 5 分鐘沉淀細胞，用 PBS 洗 1 次。重復離心。

4. 用 500 μl 0.1% Triton X-100，0.1% 檸檬酸鈉溶液 4℃ 孵育 2 分鐘透化細胞，用 PBS 洗 2 次。

5. 在室溫中于 TdT 緩沖液中用 0.3 mmol/L EFFC-12-dUTP、3 mmol/L dATP、25 mmol/L CoCl₂、25 U TdT 37℃ 孵育 1 小時，進行 TUNEL 反應，終體積 50 μl。

6. 37℃ 孵育 1 小時后，加入 2 μl 0.5 mol/L EDTA 終止反應，用 pH 7.2 的 PBS 將細胞洗 2 次。用帶有氬激光的流式細胞計量儀分析數據。