檢測器檢測。
理論上，從普通培養基中收集分泌蛋白，此時對細胞生長條件的影響最小，是最佳的實驗條件：但是這存在隱憂。因為含血清的培養基中含有非常豐富的BSA（牛血清白蛋白）之類的蛋白質，除非你進一步分離純化，否則直接用這種樣品去WB會有非常大的麻煩，尤其當你的蛋白在60-46kDa之間的時候：用“任何”抗體去檢測這一區間的蛋白，會有一片常強的信號。
因為此區間蛋白（主要是BSA）濃度過于富集，會非特異性粘附“任意”抗體從而最終被識別。同理，采用SDSLB裂解細胞制備樣品前，通常要用PBS洗滌，其目的之一是去除培養基中的BSA。
采用無血清培養基收集細胞上清除了改變細胞的生理狀態外（可能激活未知信號途徑，諸如AKT等），還會出現的問題是：
1．即使采用了無血清收集上清，仍然有大量雜蛋白，但相對好很多。
2．選用了上清，由于蛋白濃度太稀，通常要采用TCA沉淀富集，再重新溶解。
3.TCA沉淀對半定量操作要求非常高，因為很容易沉淀不充分或者離心操作丟失，尤其在離心過程，離心管的擺放非常講究，要180度翻轉離心兩次。重新溶解時，由于蛋白需要在一定的鹽離子條件下才能重新溶解，你要摸索充分溶解的條件，相對麻煩。
實際上，如果你不是非常強調蛋白的分泌有什么生理功能，一般不建議檢測上清，尤其半量的WB實驗檢測不同樣品間的差異。這里面有實驗操作細節的麻煩-經驗之談，我經參與的cancer cell 文章所研究的蛋白就是分泌型蛋白，但90％的數據是celllysis：偶用到上清，也只是作為富集純化該蛋白的原料，為進一步分析做準備。