WesternBlot實驗相關試劑的配制（二）

100mg/ml 牛血清白蛋白（BSA）

BSA                           0.1g

0.15 mol/L NaCl                   1ml

溶解后-20℃保存。制作蛋白標準曲線時，用0.15 mol/L NaCl進行100倍稀釋成1mg/ml，-20℃保存。

還原型 5XSDS 上樣緩沖液  

0.5 mol/L Tris·HCl （pH6.8）    2.5ml

二硫叔糖醇（DTT，MW154.5）      0.39g

SDS                             0.5g

溴酚藍                          0.025g

甘油                            2.5ml

混勻后，分裝于 1.5ml 離心管中，4℃保存。

電泳液緩沖液    

Tris （MW121.14）          3.03g

甘氨酸（MW75.07）        18.77g

SDS                            1g

蒸餾水至                     1000ml

溶解后室溫保存，次溶液可重復使用 3～5 次。

（電泳液可以回收重復利用，一般將回收的電泳液加入垂直電泳槽的下半部分，上半部分最好使用新鮮的電泳緩沖液）

（可以配制成 10×電泳緩沖液進行保存，稀釋 10 倍使用）

轉移緩沖液    

半干

24mmol/L Tris （MW：121.14）     1.4536 g

192mmol/L  甘氨酸（MW：75.07） 7.20672 g

20 ％甲醇                        100 ml

蒸餾水至                         500ml

浸漬（濕轉）

48mmol/L Tris             2.375g

39mmol/L 甘氨酸           11.25g

20 ％甲醇                  200ml

0.0375％SDS            0.375g

蒸餾水至                  1000 ml

溶解后室溫保存，次溶液可重復使用 3～5 次（次溶液最好保存在 4 度冰箱，最多使用 5 次左右，不然影響轉移效率）。（先用蒸餾水溶解甘氨酸、Tris 和 SDS，然后再加入甲醇，最后補足液體。如果先加入甲醇，溶解甘氨酸、Tris 和 SDS 等比較困難）

（可以配制成 2×轉移緩沖液進行保存，稀釋后使用）

10X 麗春紅染液  

麗春紅 S         2g

三氯乙酸        30g

磺基水楊酸      30g

蒸餾水至         100ml

TBS 緩沖液 

1 mol/L Tris·HCl （pH7.5） 10ml

NaCl                        8.8g

蒸餾水至                    1000ml

（可以配制成 10×TBS 緩沖液進行保存，稀釋 10 倍使用）

TBST 緩沖液       

20 ％Tween20        1.65ml

TBS                700ml

混勻后即可使用，最好現用現配。

封閉液       

脫脂奶粉（國產）             5g 

TBST                         100ml

最好現用現配。

洗脫抗體緩沖液  

14.4 mol/L β-巰基乙醇                  700μl（通風廚里加）

SDS                                                  2g

0.5mol/L Tris·HCl （pH6.8）                   12.5ml

超純水至                                           100ml

配制時，在通風廚內進行。4℃保存。可重復使用 1 次。（可用可不用）