Westernblot分析的自動化不再是夢想

　　Western blot是檢測蛋白質的一項經典技術，幾十年來一直受到人們的歡迎。不過，令人尷尬的是，這也是一個相當耗時并且難以重現的過程，有時帶來驚喜，有時則是驚嚇。

　　典型的Western blot流程大家都清楚，首先是蛋白電泳，分離后將蛋白質轉移到膜上，然后進行一系列的處理，包括封閉、一抗孵育、洗滌、二抗孵育、洗滌，最后是顯影。原理很簡單，但過程不簡單。

　　每個階段都需要精心優化，即使實驗條件最終確定，每一天的結果以及每個人的結果還是有差異。于是，研究人員開始投入自動化Western blot處理系統的懷抱，這不僅能帶來一致的結果，還能節約寶貴的時間。

　　決定Western blot成功的關鍵因素是什么？許多研究人員都認為是一抗，其實不然，檢測過程中的每個變量都有可能影響數據質量。據Precision Biosystems公司的CEO Russ Yukhananov介紹，洗滌步驟的重要性也不容小覷哦。這家公司推出了BlotCycler全自動蛋白質印跡雜交系統，可大大提高實驗的重復性。之前，ProteinSimple也推出多款自動化系統（如：Wes，Peggy Sue，Simon等），以及單細胞Western平臺—Milo。如今，研究人員有了越來越多的選擇。

Precision Biosystems公司的BlotCycler全自動蛋白質印跡雜交系統

ProteinSimple的單細胞Western平臺—Milo

　　一抗反復使用

　　Cytoskeleton的GOBlot? Western Blot處理系統是在與數百名科學家溝通后開發的，帶有四種最常用的Western blot程序。在加入封閉液和抗體溶液后，程序就可以運行。GOBlot的模塊化特征允許多臺儀器在不同時間運行，采用不同的程序和不同的抗體，所以相當靈活。

Cytoskeleton的GOBlot? Western Blot處理系統

　　據Cytoskeleton的副總裁Ashley Davis介紹，GOBlot的一個主要優勢是一抗（實驗中最昂貴的試劑）可以回收利用。科學家曾經做過實驗，將一抗回收后再重復使用三次，結果都很好，信號損失可忽略不計。

　　Prasanna Satpute-Krishnan是GOBlot?的忠實粉絲。“在實驗室的啟動階段，實驗室只有我一個，GOBlot對我幫助很大，”她說。“我只需要花10-15分鐘的時間來計劃我的Western blot，并加入封閉液、一抗和二抗，以及洗滌液，之后就可以不受干擾地做其他事情，讓機器來完成Western blot。我最喜歡的功能是單獨收集用過的一抗溶液，以便再次使用。總之，GOBlot不但節約了時間，也節省了經費。”

　　劍橋大學的研究助理Amy Emery在癌癥研究中也定期開展Western blot，并且用的是定制合成的抗體。“盡管我明白，自動化處理設備可以節省時間，因為無需手動洗滌。不過我一直不敢用，因為在我的印象中，抗體會有明顯的損失。一抗真的很貴，所以我不愿意接受不必要的浪費，但Western blot設備似乎有了很大的改進，既然能重用一抗，那么我愿意嘗試一下，”她說。

　　診斷上的應用

　　自動化Western blot系統還可以提供診斷功能，比如Tecan的ProfiBlot? 48。它每次運行可處理48個膠條樣本，自動分配試劑并完成洗滌和孵育。它支持一系列的蛋白質印跡應用，如傳染性疾病和自身免疫病的確認，以及過敏的篩查。這臺儀器符合歐盟體外診斷指令98/79/EC，在封閉環境的一次性托盤上處理整個分析，以免人體暴露于傳染性物質。

Tecan的ProfiBlot? 48

　　Tecan的項目經理Gerald Habenbacher表示，他們已經與多家實驗室合作，成功使用ProfiBlot?進行Western blot分析，并表示，這個系統的節省試劑功能可最大限度減少死體積，以便降低運行成本，同時，分配體積自動校準功能和預先設定的清潔方案使其操作起來更方便。

　　另一個大受歡迎的自動化系統是Bio-Rad的AutoBlot 3000。這臺儀器能夠在90秒內分配90個膠條，提供預先設定的實驗方案，也接受用戶自定義。Bio-Rad的產品經理Greg Stewart表示：“這個系統的靈活性極佳。它允許自由組合試劑體積、孵育時間、振搖速度和平臺溫度。AutoBlot 3000具有專門設計的托盤平臺以及獨特的吸液和分配系統，可以產生高度準確且重復的結果。”

Bio-Rad的AutoBlot 3000

　　盡管研究人員大多采用傳統的手動方案來進行Western blot，但是自動化系統的優勢越來越明顯。你可以在運行Western blot的同時開展其他實驗，大大節省時間，同時獲得重現性高的結果。診斷領域的研究人員也可以更加放心，避免暴露于有害物質。

　　隨著自動化的Western blot處理系統變得越來越先進，同時處理的印跡膜數量在不斷增加，染色操作也有各種方案可供選擇，可以滿足各種各樣的研究需求。當然，提高數據的質量和重現性，這更是它們的可貴之處。