β-葡萄糖苷酶按其底物特異性可以分為3類：
第一類是能水解烴基-β-葡萄糖苷或芳香基-β-葡萄糖苷的酶，此類β-葡萄糖苷酶能水解的底物有纖維二糖、對硝基苯-β-D-葡萄糖苷等；
第二類是只能水解烴基-β-葡萄糖苷的酶，這類β-葡萄糖苷酶能水解纖維二糖等；
第三類是只能水解芳香基-β-葡萄糖苷的酶，這類酶能水解對硝基苯-β-D-葡萄糖苷等類似物。
