單鏈cDNA的合成實驗
本方案利用的是總RNA，因為如果使用18SrRNA作內對照，在后續實驗中就不能使用帶poly(A)的RNA。并且必須用DNA酶處理RNA，以去除所有污染的基因組DNA。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑去除 RNA 酶的雙蒸水10XRT-PCR 緩沖液（去除 RNA 酶的雙蒸水，100 mmol/LTris-HCl、pH8.3，500 mmol/LKC1,15 mmol/LMgCl2)2. 酶和酶緩沖液MMLV 逆轉錄酶（100~200U/ul)SUPERaseINRNA 酶抑制劑（20U/ul;Ambion)3. 核酸和寡核苷酸dNTP 混合物（10 mmol/L，包含所有四種 dNTP)隨機引物（5umol/L)總 RNA(達到 2.5ug)4. 實驗器材薄壁的 PCR 管二、方法1. 在冰上加 2ul50umol/L 的隨機引物到薄壁的 PCR 管中（一個......閱讀全文
單鏈DNA文庫的SELEX篩選實驗
單鏈DNA文庫的SELEX篩選實驗可用于：（1）體外診斷；（2）體內治療等。實驗方法原理SELEX 技術除了可以使用 RNA 文庫以外，還可以使用單鏈 DNA 文庫進行篩選。單鏈 DNA 形成高級結構的豐富性也足夠用于對許多靶分子的篩選，而且 DNA 文庫具有更好的穩定性，操作也相對簡便。實驗材料3
cDNA鏈的連接、包裝及轉染
實驗概要本實驗介紹了構建cDNA文庫中的cDNA鏈的連接、包裝及轉染流程。主要試劑EcoRⅠ連接子試劑盒主要設備恒溫水浴，離心機、電泳儀、電泳槽、紫外觀測儀實驗步驟1. cDNA加接頭反應?? 1) 按下表準備反應體系???????????????? 10×緩沖液T4DNA連接酶? 3μl?????
cDNA鏈的連接、包裝及轉染
一：儀器:同cDNA文庫構建技術-cDNA鏈的反轉合成二：試劑:EcoRⅠ連接子試劑盒三：操作:1:cDNA加接頭反應a:按下表準備反應體系10×緩沖液T4DNA連接酶3μlBSA 3μlcDNA 2.5μl連接子 1μlT4DNA連接酶 1μl加水至 30μlb: 15℃保溫6-18小時c:70℃
單鏈構象多態性的實驗步驟
利用PCR從提取出的DNA中擴增16S rRNA基因。利用λ-外切核酸酶消化掉一條鏈（其中一個PCR引物被磷酸化，這條鏈將被去除）。非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)。
單鏈構象多態性的實驗步驟
利用PCR從提取出的DNA中擴增16S rRNA基因。利用λ-外切核酸酶消化掉一條鏈（其中一個PCR引物被磷酸化，這條鏈將被去除）。非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)。
關于cDNA合成技術的介紹
以Riboclone M-MLV CDNA合成技術為例。 Riboclone M—MLV cDNA合成系統采用M—MLV反轉錄酶的RNase H缺失突變株取代AMV反轉錄酶,使合成的cDNA更長。該系統的第一鏈合成使用M-MLV反轉錄酶,cDNA第二鏈合成采用置換合成法,采用RNaseH和DN
cDNA合成技術的基本步驟
（1）取一滅菌的無RNA酶的eppendorf管，加入RNA模板和適當引物，每RNA使用0.5ug引物（如使用Not I引物接頭，用0.3ug），用H2O調整體積至15ul，70℃處理5min冷卻至室溫，離心使溶液集中在管底，再依次加入：5X第一鏈緩沖液5ul。RNasinRNA酶抑制劑25UM—M
概述合成cDNA引物的選擇
1、隨機六聚體引物：當特定mRNA由于含有使反轉錄酶終止的序列而難于拷貝其全長序列時，可采用隨機六聚體引物這一不特異的引物來拷貝全長mRNA。用此種方法時，體系中所有RNA分子全部充當了cDNA第一鏈模板，PCR引物在擴增過程中賦予所需要的特異性。通常用此引物合成的cDNA中96%來源于rRNA
RNA的提取和cDNA合成原理和實驗方法
第一節 概 述? 從真核生物的組織或細胞中提取mRNA,通過酶促反應逆轉錄合成cDNA的第一鏈和第二鏈,將雙鏈cDNA和載體連接,然后轉化擴增, 即可獲得cDNA文庫,構建的cDNA文庫可用于真核生物基因的結構、表達和調控的分析;比較cDNA和相應基因組DNA序列差異可確定內含子存在和了解轉錄后加
cDNA文庫組標準流程五:cDNA雙鏈和載體的連接
1.連接：根據載體和cDNA的電泳定量結果，每個樣品設置3個比例的連接，即：insert/vector=1/3? incert/vector=1/1?? insert/vector=3/1按以下體系依次加入：????? ddH2O????????????????????? xulT4 ligase
RNA的提取和cDNA合成原理和實驗方法(3)
第三節 植物病毒RNA 提取大多植物病毒RNA 為單鏈RNA ，并且其極性與mRNA 極性相同，植物病毒RNA 提取較為簡單，一般使用酚氯仿即可獲得滿意結果。一、材料提純TMV病毒液（10mg/ml）。二、設備冷凍臺式離心機，低溫真空干燥儀，電泳儀，電泳槽。三、試劑TE-飽和酚:氯仿（1:1），氯仿
分子實驗方法4:RNA的提取和cDNA合成
第一節 概 述 從真核生物的組織或細胞中提取mRNA,通過酶促反應逆轉錄合成cDNA的第一鏈和第二鏈,將雙鏈cDNA和載體連接,然后轉化擴增, 即可獲得cDNA文庫,構建的cDNA文庫可用于真核生物基因的結構、表達和調控的分析;比較cDNA和相應基因組DNA序列差異可確定內含子存在和了解轉錄后加工
cDNA的合成原理、材料和方法
一 原理逆轉錄PCR (RT-PCR) 具有靈敏度高、專一性好、簡便快捷等優點，其不僅是定量檢測微量樣品和表達水平低的基因的一種有效方法，同時也是從真核生物中獲得目的基因的一條重要途徑。cDNA的合成是RT-PCR的重要環節。以mRNA為模板，在逆轉錄酶的催化下，隨機引物、oligo(dT)或基因特
寡核苷酸指導的單鏈－DNA－誘變實驗
本文介紹了由 Zoller 和 Smith 的雙引物技術（1984,1987) 結合 Kunkel 的誘變體產量富集方法（1985) 構成的經典方案。本方案中使用的單鏈 DNA 模板含有較高的尿嘧啶殘基，因為它們是從生長于 dut 和 ung 基因突變大腸菌中的 M13 噬菌體中制備的（見方案 1)
寡核苷酸指導的單鏈－DNA－誘變實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 適用于轉化的大腸桿菌菌株 用于轉化的大腸桿菌 TG1 感受態菌 試劑、試劑盒 ATP
寡核苷酸指導的單鏈－DNA－誘變實驗
實驗材料 適用于轉化的大腸桿菌菌株 用于轉化的大腸桿菌 TG1 感受態菌試劑、試劑盒 ATPPE1緩沖液PE2 緩沖液噬菌體 T4 DNA 連接酶噬菌體 T4 多核苷酸激酶大腸桿菌 DNA 聚合酶ⅠKlenow 片段M13 噬菌體通用測序引物含 4 種 dNTP 的 dNTP 溶液誘變的 M
單鏈互補DNA的定義
中文名稱單鏈互補DNA英文名稱single-strand cDNA;sscDNA定 義在逆轉錄酶催化下，以信使核糖核酸(mRNA)為模板合成與mRNA序列互補的單鏈DNA。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），核酸與基因（二級學科）
單鏈DNA的結構特點
單鏈DNA就是指以這種狀態存在的DNA。單鏈DNA在分子流體力學性質、吸收光譜、堿基反應性質等方面都和雙鏈DNA不同。某些噬菌體粒子內含有單鏈環狀的DNA，這樣的噬菌體DNA在細胞內增殖時則形成雙鏈DNA。
單鏈RNA的結構特點
中文名稱單鏈RNA英文名稱single-stranded RNA;ssRNA定 義只含有一條鏈的RNA分子。生物體中絕大部分RNA是單鏈RNA，形成二級結構時，是既有單鏈、又有雙鏈結構域的RNA分子；只有某些RNA病毒是由兩條鏈互補而成的雙鏈RNA。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），核酸與
免疫學實驗抗單鏈DNA(ssDNA)抗體介紹
抗單鏈DNA(ssDNA)抗體介紹： 抗ssDNA是抗DNA抗體中臨床意義和重要性都不如抗dsDNA的一種，DNA是一個大分子的復合物，由兩條核苷酸鏈形成的雙螺旋結構。加熱時堿基間的氫鍵斷裂，DNA變性產生ssDNA。抗ssDNA的反應位點主要是ssDNA上的嘌呤和嘧啶構成的堿基。 抗單鏈D
RNA的提取和cDNA合成（酸苯酚法）
內 容 提 要利用酸-苯酚法提取植物葉片中的RNA，并對其進行純化，最后利用反轉錄酶得到相應的cDNA，可用于以后的分子生物學操作。本實驗要求：1、掌握酸-苯酚法提取RNA的方法。2、了解RNA操作中的重要性。原 理從真核生物的組織或細胞中提取mRNA,通過酶促反應逆轉錄合成cDNA 的第一鏈和第二
抗單鏈DNA抗體的概述
抗ssDNA是抗DNA抗體中臨床意義和重要性都不如抗dsDNA的一種，DNA是一個大分子的復合物，由兩條核苷酸鏈形成的雙螺旋結構。加熱時堿基間的氫鍵斷裂，DNA變性產生ssDNA。抗ssDNA的反應位點主要是ssDNA上的嘌呤和嘧啶構成的堿基。
單鏈RNA的基本信息
中文名稱單鏈RNA英文名稱single-stranded RNA;ssRNA定 義只含有一條鏈的RNA分子。生物體中絕大部分RNA是單鏈RNA，形成二級結構時，是既有單鏈、又有雙鏈結構域的RNA分子；只有某些RNA病毒是由兩條鏈互補而成的雙鏈RNA。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），核酸與
單鏈突出端的定義
中文名稱單鏈突出端英文名稱overhang定 義雙鏈核酸末端帶有一個或多個未配對核苷酸的單鏈部分。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二級學科）
基本方案1－cDNA－合成與印跡
實驗材料母板試劑、試劑盒細菌細胞中的標記LB 培養基氨芐青霉素乙醇Super 肉湯培養基甘油96孔堿裂液T low E 緩沖液10 X PCR 緩沖液20 X SSC琥拍酸酐儀器、耗材96深孔板和V 形塑料細胞培養皿水平微量培養板離心96孔多位點復制針1 加侖儲存袋多微孔的帶層帶孔的振蕩器用于深孔板
細胞化學詞匯單鏈DNA
中文名稱：單鏈DNA外文名稱：single－stranded DNA術語含義：單鏈DNA就是指以這種狀態存在的DNA。單鏈DNA在分子流體力學性質、吸收光譜、堿基反應性質等方面都和雙鏈DNA不同。某些噬菌體粒子內含有單鏈環狀的DNA，這樣的噬菌體DNA在細胞內增殖時則形成雙鏈DNA。
單鏈DNA探針技術簡介
用雙鏈探針雜交檢測另一個遠緣DNA時,探針序列與被檢測序列間有很多錯配。而兩條探針互補鏈之間的配對卻十分穩定,即形成自身的無效雜交,結果使檢測效率下降。采用單鏈探針則可解決這一問題。單鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:(1) 以M13載體衍生序列為模板,用Klenow片段合成單鏈探針; (2)
單鏈構象多態性
單鏈構象多態性（signle strand conformation polymorphism,SSCP）是指單鏈DNA由于堿基序列的不同可引起構象差異，這種差異將造成相同或相近長度的單鏈DNA電泳遷移率不同，從而可用于DNA中單個堿基的替代、微小的缺失或手稿的檢測。用SSCP法檢查基因突變時，通常
從M13噬菌體模板合成固定長度的單鏈DNA探針
實驗材料 大腸桿菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段限制性內切核酸酶模板 DNA寡核苷酸引物試劑、試劑盒 乙酸銨DTTEDTA乙醇NaCl酚氯仿TBE 電泳緩沖液Tris-ClKlenow 基礎緩沖液dNTP 溶液儀器、耗材 變性聚丙烯酰胺凝膠或堿性瓊脂糖凝膠黏性貼片或磷光黏性貼片Sephad
從M13噬菌體模板合成固定長度的單鏈DNA探針
? ? ? ? ? ? 實驗材料 大腸桿菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段 限制性內切核酸酶 模板 DNA 寡核苷酸引物 試劑、試