非標記抗體免疫酶組織化學實驗——ABPAP法
實驗方法原理ABPAP 法是 PAP 法和 ABC 法的聯合應用，使更多的酶分子結合到抗原-抗體復合物上，目的就是增加方法的敏感性。其原理見圖 4-11。作者應用了 30 余種特異性一抗、鼠源性和兔源性 PAP 復合物以及 ABC 檢測系統，結果 ABPAP 法比單一的 PAP 法要敏感 7～8 倍，比單一的 ABC 法要敏感 1～4 倍。實驗材料石蠟切片ABC 復合物PAP 復合物動物血清試劑、試劑盒蛋白酶特異性一抗橋抗體PBSDABH2O2儀器、耗材滴管玻片實驗步驟1. 4 μm 石蠟切片 58℃ 烤片 4 h，切片常規脫蠟至水，PBS 洗 3 min×3 次。2. 蛋白酶消化或 AR（組織抗原的暴露或抗原的修復，此步視情況而定）。3. 0.3％ H2O2 處理切片 20 min（室溫），PBS 洗 3 min × 2 次。4. 3％ 正常動物血清處理切片 30 min（室溫），吸去多余血清，不洗。5. 適當稀釋的......閱讀全文
非標記抗體免疫酶組織化學實驗——ABPAP－法
實驗方法原理ABPAP 法是 PAP 法和 ABC 法的聯合應用，使更多的酶分子結合到抗原-抗體復合物上，目的就是增加方法的敏感性。其原理見圖 4-11。作者應用了 30 余種特異性一抗、鼠源性和兔源性 PAP 復合物以及 ABC 檢測系統，結果 ABPAP 法比單一的 PAP 法要敏感 7～8 倍
非標記抗體免疫酶組織化學實驗——酶橋法
由于在酶標記抗體過程中，酶與抗體的結合可損害部分抗體和酶的活性，從而降低了抗體的效價。另外，血清中的非特異性抗體也可以被酶標記，這些非特異酶標記抗體與組織中相應抗原結合，放大了非特異背景染色。為了避免酶標記抗體法的上述缺點，Sternberger（1969）在酶標抗體法的基礎上，創建了非標記抗體免疫
非標記抗體免疫酶組織化學實驗——PAP－法
實驗方法原理與酶橋法相似，不同的是酶橋法分四步，而 PAP 法分三步。PAP 法將酶橋法的步驟（3）、步驟（4）合二并為一，用 PAP 復合物替代，故稱 PAP 法（圖 4-9）。PAP 復合物中的抗 HRP 抗體和第一抗體必須為同一種屬動物的 IgG，這樣橋抗體才能作為「橋」將 PAP 復合物連接
非標記抗體免疫酶組織化學實驗——雙－PAP－法
實驗方法原理在 PAP 法的基礎上重復第二抗體和 PAP 復合物，重復的連接抗體和 PAP 復合物可能有以下兩種連接方式（圖 4-10）。第一種（A）重復連接抗體可與一個 PAP 中的抗 HRP 抗體上未飽和的 Fc 段結合，再與后加的 PAP 復合物相結合；第二種（B）重復連接抗體與特異性一抗分子
非標記抗體免疫酶組織化學實驗
實驗方法原理 首先用酶免疫動物制備成效價高、特異性強的抗酶抗體。在特異性抗體與抗酶抗體之間利用第二抗體作「橋梁」，將它們連接起來，再將酶結合在抗酶抗體上，經顯色顯示抗原的定位。其基本流程為：抗原+特異性抗體 → 第二抗體（橋抗）→ 抗 HRP 抗體 → HRP → DAB+H2O2（顯色）。因為橋抗
非標記抗體免疫電鏡實驗——經典法
不標記抗體法通過系統的非標記抗體的免疫學反應，對組織中的抗原進行定位檢測。分為用標記物顯示和不同標記物顯示兩種方法。用于（1）抗體觀察（2）免疫學研究。實驗方法原理標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱；化學交聯反應對抗體和酶的活性有
非標記抗體免疫電鏡實驗——快速法(瓊脂擴散法)
實驗方法原理標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱；化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響；結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素，通過一系統的非標記抗體的免疫學反應，對組織
酶免疫技術抗體的酶標記方法
用于酶免疫技術的酶須具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室溫下穩定;反應產物易于顯現;能商品化生產。目前酶免疫技術檢測中常用的酶為辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)和堿性磷酸酶(AP),其次還有葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、溶菌酶和蘋果酸脫氫酶等。由于辣根過氧化
非標記抗體酶法PAP法
PAP復合物是離體制備的HRP抗HRP復合物，它的制備方法較多，現簡介其中之一。（1）制備抗HRP血清：健康雄性家兔（2．Okg以上），可先于足趾皮下注射滅活的卡介苗（共lOmg），2周后重復1次，刺激機體免疫系統功能，1周后于背部脊柱兩旁皮內多點注射1．Oral乳劑[福氏完全佐劑，含HRP3。3m
非標記抗體免疫電鏡實驗
實驗方法原理 標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱；化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響；結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素，通過一系統的非標記抗體的免疫學反應，對組
免疫球蛋白標記技術_酶標記抗體
免疫標記技術是用特定的物質標記抗原或抗體進行的抗原抗體反應。可借助各種儀器觀察結果或進行自動化測定，可在細胞、亞細胞、超微結構及分子水平上，對抗原抗體反應進行定性和定位研究；或應用各種液相和固相免疫分析方法，對液體中的抗原、半抗原或抗體進行定性和定量測定。實驗方法原理酶標記物包括酶標記抗原、酶標記抗
酶標記抗體
酶標記物包括酶標記抗原、酶標記抗體和酶標記SPA等。酶標記物質量的好壞直接關系到免疫酶技術的成功與否，因此被稱為關鍵的試劑。酶標記物中最常用的是酶標記抗體，它是將酶與特異性抗體經適當方法連接而成。酶標記抗體的質量主要取決于純度好、活性強及親和力高的酶和抗體，其次要有良好的制備方法。目前，高質量的酶(
非標記抗體免疫電鏡實驗技術
實驗概要本文介紹了非標記抗體免疫電鏡實驗技術的具體操作方法。實驗原理標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱；化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響；結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的
非標記抗體免疫電鏡實驗技術
（一） 原理標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱；化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響；結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素，通過一系統的非標記抗體的免疫學反應，對組織
非標記抗體免疫電鏡實驗技術
(一) 原理標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱;化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響;結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素，通過一系統的非標記抗體的免疫學反應，對組織
非標記抗體免疫電鏡實驗技術
實驗概要本文介紹了非標記抗體免疫電鏡實驗技術的具體操作方法。實驗原理標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱；化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響；結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的
免疫堿性磷酸酶組織化學實驗——APAAP－法
實驗方法原理APAAP 法的原理與 PAP 法類似，都屬于未標記抗體橋聯法，所不同的是用 AKP 取代了 HRP。該方法較 IAP 法敏感性髙，特別是用于標記固定過的組織。APAAP 法的主要優點是非特異性背景染色較淺，因為其不受內源性過氧化物酶的干擾，APAAP 復合物所用的 AKP 是從小牛腸組
酶標記抗體HRP標記抗體戊二醛二步法
實驗概要本實驗介紹了酶標記抗體-HRP標記抗體中的戊二醛二步法的操作流程。實驗原理戊二醛為一種雙功能試劑，通過其醛基分別與酶和免疫球蛋白上的氨基共價結合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白結合物。主要試劑1. 0.1M PH6.8磷酸緩沖鹽水(PBS)：取0.2M Na2HPO4 49ml, 0.2M Na
免疫堿性磷酸酶組織化學實驗——間接免疫堿性磷酸酶法
免疫堿性磷酸酶組織化學技術是以堿性磷酸酶（AKP 或 AP）取代 HRP 來顯示結果的免疫酶組織化學技術。最早出現的是間接免疫堿性磷酸酶法（IAP），1983 年 Mason 及 Moir 等建立了堿性磷酸酶抗堿性磷酸酶（APAAP）復合物法。隨后，人們建立了更為敏感的生物素-親和素-堿性磷酸酶復合
免疫金組織化學染色實驗——IGSS－法
實驗方法原理免疫金銀染色（immunogold silver staining；IGSS）的基本原理是通過免疫反應沉積在抗原位置的膠體金顆粒起著一種催化劑作用，用對苯二酚還原劑將銀離子（Ag+）還原成銀原子（Ag），被還原的銀原子圍繞金顆粒形成一個「銀殼」，「銀殼」一旦形成本身亦具有催化作用，從而使
免疫金組織化學染色實驗——CIGSS－法
實驗方法原理彩色免疫金銀染色方法（coloured IGSS，CIGSS）是由 Frite 和 Hoenes 等（1986）建立的一種新方法，劉彥仿等1988）在《中華病理學雜志》上也報道了改進后的 CIGSS 方法。其基本原理是在 IGSS 法的基礎上，根據洗彩色照片的顯影原理而發展起來的，即 I
親和免疫組織化學實驗——－CSA法
實驗方法原理催化信號放大系統（catalyzed signal amplification system，CSA），也稱釀胺信號放大（tyramine signal amplification system，TSA）或稱 CARD（catalyzed repoter deposition）。該方法的
親和免疫組織化學實驗——LSAB－法
實驗方法原理LSAB 法或稱 S-P 法、SABC 法，它是采用生物素標記的第二抗體與結合有 HRP 或 AKP 酶的鏈霉親和素（streptavidin）連接來測定細胞及組織中的抗原。鏈霉親和素是一種從鏈霉菌培養物中提取的蛋白質，相對分子質量 60000，不含糖鏈，等電點 pI 為 6.0～6.5
親和免疫組織化學實驗——ABC－法
實驗方法原理ABC 法即親和素-生物素-過氧化物酶復合物法，是許世明于 1981 年在 BAB 法和 LAB 法的基礎上改良的，其特點是利用親和素分別連接生物素標記的第二抗體和生物素標記的酶。ABC 法與 LAB 法、BAB 法不同的是第一抗體不為生物素所標記，生物素標記的第二抗體與 ABC 復合物
病毒免疫熒光實驗_?熒光素標記抗體
實驗材料熒光色素試劑、試劑盒抗體實驗步驟熒光標記抗體方法有直接標記法和間接標記法兩種。(1) 直接法：較為常用，具體步驟是：1) 抗體溶液的制備：用 0.01mol/L pH 7.1 PBS 將待標記抗體稀釋至 20mg/ml;2) 熒光素：根據待標記抗體的總量，按 0.01mg 熒光素/mg 蛋白
免疫電鏡相關技術實驗——酶標記免疫電鏡技術
實驗方法原理該技術是以酶為抗原—抗體反應的標記物，在不改變抗原抗體的免疫反應特異性，亦不降低酶活性條件下，與相應底物作用后形成不溶性的反應物。在電鏡下形成為電子散射力強的終末產物。用于免疫電鏡標記的酶有辣根過氧化物酶 (HRP)堿性磷酸酶 (AKP 或 ALP)葡萄糖氧化酶(GOP) 等。目前常用的
?－免疫組織化學法實驗——懸浮細胞的免疫熒光標記
實驗材料細胞生長于含培養液的15 mL Falcon管中試劑、試劑盒PBSPFA固定液儀器、耗材多聚L-賴氨酸包被的載玻片實驗步驟1) 細胞在冰浴中冷卻，然后用臺式離心機在4℃以800 g離心5 min (用于淋巴細胞）。吸去培養液并以4℃的PBS重懸細胞。離心機轉速依細胞類型進行調整，但必須低轉速
免疫組織化學法實驗——組織切片的免疫熒光標記
實驗材料組織樣本冰凍切片置于載玻片上試劑、試劑盒PBS第一抗體5?10μg mL第二抗體特異性針對第一抗體的抗體突光染料結合物封片介質（如Gelvatol)儀器、耗材塑料玻片盒或加濕盒實驗步驟1) 將濕紙巾鋪于載玻片盒底部做成加濕盒。從冰凍切片機或冰箱取出載有切片的載玻片，交叉放入玻片盒（每邊約6片
關于酶標記抗體實驗的結果判定介紹
(1)定性及效價滴定：用特異性抗原(或抗體)同酶標記抗體(或抗免疫球蛋白抗體)作雙向瓊脂擴散試驗或免疫電泳試驗。然后用酶的底物使沉淀弧顯色，可初步鑒定其活性。最后以直接ELISA法(或在正式實驗系統里)對酶結合物進行滴定( 見本節 (三)工作濃度的選擇)。 (2)定量和克分子比值測定：可用分光
非標記抗體免疫電鏡
原理?標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱；化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響；結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素，通過一系統的非標記抗體的免疫學反應，對組織中的抗