類器官熒光染色實驗流程(二)
染色(免疫熒光)10. 晾干切片,使用免疫組化筆標出類器官切片的部分。11. 使用適合的封閉緩沖液在室溫封閉1小時(或按照常用的封閉方法進行封閉)。12. 加一抗,室溫孵育2小時,或在4度孵育過夜。13. 用PBS清洗2次,每次2分鐘。14. 加二抗,室溫孵育1小時。避光。15. 用PBS清洗兩遍,用dH2O清洗一遍。每次2分鐘,晾干。16. 在每個切片上加一滴含DAPI的ProLong? Gold防猝滅封固劑,輕輕覆蓋一片蓋玻片。用一個200 μL槍頭輕壓蓋玻片,壓出氣泡。靜置10-15分鐘。17. 使用透明的指甲油封上載玻片,晾干15分鐘。18. 使用熒光顯微鏡觀察。染色(H&E)19. 把類器官部分放在haematoxylin里5分鐘,然后使用自來水清洗1分鐘 。20. 對類器官切片進行染色(如蘇木精染色),可以用碳酸鋰或“Scott’s tap water” 染色1分鐘,然后用自來水清洗一分鐘。21. 將切片放在......閱讀全文
類器官熒光染色實驗流程(二)
染色(免疫熒光)10. 晾干切片,使用免疫組化筆標出類器官切片的部分。11. 使用適合的封閉緩沖液在室溫封閉1小時(或按照常用的封閉方法進行封閉)。12. 加一抗,室溫孵育2小時,或在4度孵育過夜。13. 用PBS清洗2次,每次2分鐘。14. 加二抗,室溫孵育1小時。避光。15. 用PBS清洗兩遍,
類器官熒光染色實驗流程(一)
固定注意: 合并2-3孔的幾十個類器官最為理想,但也可只使用一個孔的類器官。使用PFA固定和O.C.T包埋的實驗流程使用1.5 mL的EP管收集類器官,使用4% PFA溶液室溫固定半小時。室溫下用PBS清洗3次,每次5分鐘。然后將樣本轉移至30% 蔗糖溶液4度孵育過夜。第二天,移除蔗糖溶液,在O
類器官特性分析過程的流程
詳細的類器官特性分析過程的流程:一、實驗準備培養類器官至合適的階段,確保其生長狀態良好。準備所需的實驗試劑、儀器設備,如顯微鏡、離心機、PCR 儀等。二、形態學觀察光學顯微鏡觀察在低倍和高倍鏡下觀察類器官的整體形態、大小和結構。記錄類器官的輪廓、有無腔隙或分支等特征。電子顯微鏡觀察(如有需要)對類器
色素類染色實驗
實驗方法原理 含鐵血黃素是一種血紅蛋白源性色素,常規染色為棕黃色大小不等的顆粒,呈點狀和團塊狀分布于細胞內或細胞外。有的存在于血管內。染色反應是由于三價鐵離子從蛋白質中被鹽酸分離出來,再與亞鐵氡化鉀反應,生成藍色的亞鐵氰化鐵物質,通常用普魯士(Perls)藍反應。實驗材料 石蠟組織切片試劑、試劑盒
類器官技術臨床應用質量標準的流程
類器官技術臨床應用質量標準的流程通常包括以下步驟:確定需求和目標明確制定質量標準的目的,例如保障患者安全、提高治療效果、促進技術的規范化應用等。確定標準適用的范圍,包括具體的疾病類型、臨床應用場景等。組建專家團隊召集來自臨床醫學、生物學、生物工程、統計學、質量控制、倫理學等多領域的專家。文獻研究系統
革蘭氏染色的實驗流程
1、 取載玻片用紗布擦干,載玻片的一面用marker筆畫一個小圈(用來大致確定菌液滴的位置)。涂菌的部位在火焰上烤一下,除去油脂。 2、 涂片: 液體培養基:左手持菌液試管,在酒精燈火焰附近5cm左右打開管蓋;右手持接種環在火焰中燒灼滅菌,等冷卻后從試管中沾取菌液一環,在潔凈無脂的載玻片上涂
類器官
以下是一些可能有助于提高類器官的結構和功能完善程度的方法:優化培養條件:包括培養基成分、生長因子的組合和濃度、細胞外基質的選擇和優化等。例如,通過篩選和調整各種細胞因子的比例,更好地模擬體內細胞生長的微環境。引入血管化和神經支配:開發新的技術手段來構建類器官中的血管網絡和神經連接,以增強營養物質供應
實時熒光定量PCR(RealTimePCR)實驗流程(二)
五、cDNA與引物質量檢測 取0.2ml薄壁PCR管,編號。向各管中加入含染料2×PCRTaqMix10ul;加入正反向引物各0.5ul(引物濃度10uM),向管中加入混合的cDNA各1ul。各管補加水至20ul。 組份加量 2×PCRTaqMix10ul 10uMPrime
類器官(organoids):器官芯片技術培育人胰島類器官
近日,中國科學院大連化學物理研究所研究員秦建華團隊利用器官芯片技術培育人多能干細胞衍生的胰島類器官取得新進展,相關成果發表在器官芯片領域刊物Lab on a chip上,并被選為封面文章。 類器官(organoids)是一種通過干細胞自組織方式形成的多細胞三維復雜結構,它能夠在體外模擬具有來源
免疫熒光實驗流程
免疫熒光實驗步驟實驗流程:(1) 細胞準備。對單層生長細胞,在傳代培養時,將細胞接種到預先放置有處理過的蓋玻片的培養皿中,待細胞接近長成單層后取出蓋玻片,PBS洗兩次;對懸浮生長細胞,取對數生長細胞,用PBS離心洗滌(1000rpm,5min)2次,用細胞離心甩片機制備細胞片或直接制備細胞涂
色素類染色實驗_含鐵血黃素染色
實驗方法原理含鐵血黃素是一種血紅蛋白源性色素,常規染色為棕黃色大小不等的顆粒,呈點狀和團塊狀分布于細胞內或細胞外。有的存在于血管內。染色反應是由于三價鐵離子從蛋白質中被鹽酸分離出來,再與亞鐵氡化鉀反應,生成藍色的亞鐵氰化鐵物質,通常用普魯士(Perls)藍反應。實驗材料石蠟組織切片試劑、試劑盒二甲苯
色素類染色實驗_膽色素染色
實驗方法原理在不正常的情況下,如血紅蛋白分解產物和代謝發生的障礙等情況,使膽紅素的含量增多,在組織中形成大小不等的顆粒或團塊狀物質,通過 Hall 膽紅素反應,能夠清楚地顯示膽色素。實驗材料石蠟組織切片試劑、試劑盒二甲苯乙醇蒸餾水三氯乙酸三氯化鐵麗春紅 S 水溶液苦味酸飽和液中性樹膠儀器、耗材滴管玻
色素類染色實驗_脂褐素染色
實驗方法原理脂褐素是一種衰老或破壞的線粒體和內質網等細胞器結構經過溶酶體消化未完的殘余物,多見于老年入或患慢性消耗性疾病患者的組織細胞,常用 Schmorl 反應方法染色。實驗材料石蠟組織切片試劑、試劑盒二甲苯無水乙醇中性樹膠蒸餾水鐵氰化鉀三氯化鐵中性紅乙酸儀器、耗材滴管玻片實驗步驟試劑配制三氯化鐵
色素類染色實驗_黑色素染色
實驗方法原理黑色素不正常情況下,可在全身各處形成含有黑色素的沉著物。黑色素組織易保存,常規固定劑與石蠟組織切片均不會丟失,其形態特點為大小不等的顆粒狀物質,經過 Masson Fontana 的氨銀液作用一定時間后,能夠較好地顯示黑色素。實驗材料石蠟組織切片試劑、試劑盒二甲苯無水乙醇中性樹膠蒸餾水硝
SYPRO-Ruby-熒光染色實驗
實驗方法原理到目前為止,在常用來檢測經聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后的蛋白質的方法中,SYPRORUBY 可能是最靈敏的突光染色方法了,它能檢測出僅含 1?2ng 蛋白的條帶。遺憾的是,如此微量的蛋白條帶經染色后用肉眼卻不可見,需要一個熒光掃描儀檢測(SYPRORuby 的最大激發光和發射光的波長分別是
SYPRO-Orange-熒光染色實驗
實驗材料單向凝膠電泳分離后的蛋白樣品儀器、耗材鋁箔熒光掃描儀塑料容器實驗步驟1.電泳結束后,將凝膠置于盛有試劑 A 的塑料容器中,試劑 A 的量要足夠覆蓋整塊凝股。例如,一’塊典型的 mini 膠(8 cmXIOcm 或 8 cmX8 cm) 需用 50~IOOml 的試劑 A。2.用鋁箔遮蓋好容器
制定類器官技術臨床應用質量標準的流程是什么?
制定類器官技術臨床應用質量標準的流程通常包括以下步驟:需求評估確定類器官技術臨床應用的范圍和重點領域。收集相關臨床數據和應用情況,了解當前存在的問題和需求。組建專家團隊召集來自生物學、醫學、藥學、統計學、倫理學等多領域的專家。確保團隊具備豐富的類器官研究和臨床應用經驗。文獻研究系統回顧國內外已有的類
從3D類器官到單細胞(二)
?? PerkinElmer高內涵系統的3D方案不僅僅局限于3D微組織,包括模式生物、細胞偽足等立體結構都可以通過高內涵系統完成全面的檢測和分析:? 珀金埃爾默的單細胞ICP-MS技術,基于業界較快的的細胞脈沖信號讀取速度(可達100000點每秒),能定量單個細胞中低至阿克級別的金屬和納米顆粒含量
Nature:實驗室中的類器官——“腎”
刊登在國際雜志Nature上的一篇研究報告中,來自澳大利亞和荷蘭的科學家們通過研究表示,他們在實驗室中成功利用干細胞培養出了具有初步生長狀態的人類腎臟組織,而這一過程通向在實驗室中開發全功能性的移植器官又進了一步。 研究者表示,這種組織并不是一種有活力的組織,但可以用于其它用途,比如在藥物毒性
類器官未來會取代天價實驗猴嗎?
《科創板日報》10 月 10 日訊(記者 朱潔琰)?日前,美國參議院通過的美國食品藥品監督管理局現代化法案(FDA Modernization Act 2.0)的消息引起業界關注,緣于該法案旨在推動減少臨床前試驗對動物的應用,用更現代的科學方法取而代之。對此,有市場解讀說,該法案出臺后,美國制藥界可
病毒免疫熒光實驗_?熒光抗體染色
實驗材料細胞小玻片標本試劑、試劑盒熒光抗體實驗步驟熒光抗體染色按不同反應機制,可有以下幾種:1.直接法 用已知特異性病毒抗體與熒光素結合,制成熒光特異性抗體,直接與細胞或組織中相應病毒抗原結合,在熒光顯微鏡下即可見病毒或病毒抗原存在部位呈現特異性熒光。此法特異簡便,但一種熒光抗體只能檢查一種抗原,特
類器官技術簡介
類器官技術?是一種新興的、具有巨大潛力的生物技術。它是指在體外利用干細胞或特定組織的細胞,通過特定的培養條件和生物材料的支持,誘導其形成具有三維結構和一定功能的類似于體內器官的細胞聚集體。類器官技術的關鍵步驟包括:細胞獲取:通常從胚胎干細胞、誘導多能干細胞或成體組織中的干細胞分離得到起始細胞。培養體
類器官的優勢
類器官的優勢在于:疾病模型構建:可以用于研究各種疾病,特別是癌癥,更好地模擬腫瘤的異質性和微環境。藥物篩選:為藥物研發和測試提供更接近體內真實情況的模型,提高藥物篩選的效率和準確性。發育生物學研究:有助于了解器官的發育機制和細胞命運決定。
類器官的概念
類器官(Organoid)是指在體外培養條件下,由干細胞或祖細胞分化形成的具有三維結構和一定生理功能的類似于器官的細胞集合體。
類器官的特點
三維結構:與傳統的二維細胞培養相比,更接近體內器官的空間結構。部分功能模擬:能夠展現出一定程度上類似于體內器官的生理功能。類器官的構建通常基于干細胞,包括胚胎干細胞、誘導多能干細胞和成體干細胞。例如,利用腸道干細胞可以培養出腸道類器官。
什么是類器官?
類器官屬于三維(3D)細胞培養物,包含其代表器官的一些關鍵特性。此類體外培養系統包括一個自我更新干細胞群,可分化為多個器官器官特異性的細胞類型,與對應的器官擁有類似的空間組織并能夠重現對應器官的部分功能,從而提供一個高度生理相關系統。
類器官當前成就
類器官研究的當前成就已經非常顯著,并且在多個方面推動了生物醫學科學的發展。以下是一些關鍵的成就: 多種類器官的成功構建: 科學家們已經能夠從人類和動物的干細胞和組織源性細胞中構建出多種類型的類器官,包括腸道、胃、肝臟、胰腺、腎臟、心臟和大腦等。 疾病模型的建立: 類器官技術被廣泛應用于模
如何培養類器官?
培養類器官通常需要以下步驟:細胞來源選擇可以使用干細胞(如胚胎干細胞、誘導多能干細胞)或成體組織中的祖細胞。這些細胞通常需要經過分離和純化處理。培養基質準備常用的基質包括細胞外基質成分,如基質膠(Matrigel)等。為細胞提供生長和附著的支架。培養基配制根據要培養的類器官類型,添加特定的生長因子、
類器官技術簡介
類器官技術是一種利用細胞培養技術構建人工器官的方法。它通過將不同類型的細胞種植在三維支架上,使其形成類似于真實器官的結構和功能。類器官通常來源于干細胞(多能干細胞、胎兒或成人來源的),也可以由組織衍生細胞培養而成,這些細胞包括正常干細胞/祖細胞、分化細胞和癌細胞等。其組成類器官的細胞可衍生自誘導多能