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    反義技術——RNA干擾(RNAinterference,RNAi)

    最近由于RNA干擾(RNA interference,RNAi)的發現使反義領域的研究增多。這種自然發生的現象最早是在秀麗線蟲中發現的(1),是序列特異性地使轉錄后的基因沉默的有力機制。由于最近兩年在RNAi領域取得的進步,已經有許多這方面的綜述發表(2-4)。RNA干擾是由長的雙鏈 RNA分子發動的,該分子可以被Dicer enzyme加工成長度為21-23個核苷酸的RNA(見圖)。RNaseIII蛋白被認為是作為一個二聚體發揮作用,它對雙鏈RNA的兩個鏈都進行切割,酶切的產物3’末端互相重疊。然后這種小的干擾RNA分子(small interfering RNAs,siRNAs)摻入RNA誘導的沉默復合物(RNA- induced silencing complex,RISC),引導核酸酶降解靶RNA。 這種保守的生化機制可用于研究多種模式生物的基因功能,但是它在哺乳動物細胞中的應用受到阻礙,因為長的......閱讀全文

    RNAi表達載體構建

    近年來的研究表明,一些短片斷的雙鏈RNA可以通過促使特定基因的mRNA降解來高效、特異的阻斷體內特定基因表達,誘使細胞表現出特定基因缺失的表型, 稱為RNA干擾(RNA interference,RNAi).siRNA(small interfering RNAs)就是這種短片斷雙鏈RNA分子,能夠

    RNAi表達載體構建(一)

    近年來的研究表明,一些短片斷的雙鏈RNA可以通過促使特定基因的mRNA降解來高效、特異的阻斷體內特定基因表達,誘使細胞表現出特定基因缺失的表型, 稱為RNA干擾(RNA interference,RNAi).siRNA(small interfering RNAs)就是這種短片斷雙鏈RNA分

    RNAi技術研究進展

    RNA干擾(RNA interference,RNAi)是多種生物體內由雙鏈RNA(doublestranded RNA,dsRNA)介導同源mRNA 降解的現象。RNAi現象先后在不同生物中被發現,植物學家稱它為共抑制(co-suppression)或轉錄后基因沉默(post tran

    RNA干擾技術(RNA interference,RNAi)

    1995年,康乃爾大學的Su Guo博士在試圖阻斷秀麗新小桿線蟲(C. elegans)中的par-1基因時,發現了一個意想不到的現象。她們本是利用反義RNA技術特異性地阻斷上述基因的表達,而同時在對照實驗中給線蟲注射正義RNA(sense RNA)以期觀察到基因表達的增強。但得到的結果

    RNAi

    1995年,康乃爾大學的Su Guo博士在試圖阻斷秀麗新小桿線蟲(C. elegans)中的par-1基因時,發現了一個意想不到的現象。她們本是利用反義RNA技術特異性地阻斷上述基因的表達,而同時在對照實驗中給線蟲注射正義RNA(sense RNA)以期觀察到基因表達的增強。但得到的結果是二者都同樣

    RNAi基因沉默方法

    大約在十年前,2006年諾貝爾生理/醫學獎得主CraigMello和AndrewFire發現,他們能夠將短RNA 分子插入到線蟲中并沉默特定基因的表達。今天,研究人員也常常使用這種強大的RNA 干擾方法來研究哺乳動物系統中的特定基因功能。為了進行這種基因沉默實驗,研究人員通常需要依賴化學合成的RNA

    細胞自噬過程的觀察和檢測方法

    細胞自噬過程的觀察和檢測可應用于:(1)研究細胞防御和應激調控機制;(2)自噬體膜的來源問題研究。(3)細胞器自噬研究。實驗方法原理正常培養的細胞自噬活性很低,不適于觀察,因此,必須對自噬進行人工干預和調節,包括自噬誘導劑、自噬抑制劑等工具藥,以及反義RNA干擾技術(Knockdown)、突變株篩選

    細胞自噬過程的觀察和檢測方法

    工具藥、融合蛋白等示蹤自噬形成             實驗方法原理 正常培養的細胞自噬活性很低,不適于觀察,因此,必須對

    細胞自噬過程的觀察和檢測方法

    工具藥、融合蛋白等示蹤自噬形成             實驗方法原理 正常培養的細胞自噬活性很低,不適于觀察,因此,必須對

    價值數十億美元的生物科技公司

       Moderna Therapeutics公司可謂野心勃勃,但是它也有相配套的巨額資金支持。這家羽翼未豐的新創公司是如何成為有史以來最有價值的私有藥物公司之一的呢?  在兩年半前的一次早餐會上,制藥巨頭Astra-Zeneca公司新上任的首席執行官Pascal Soriot簽署了一份藥物研發協議

    冷泉港實驗室:劃算的基因沉默方法

    大約在十年前,2006年諾貝爾生理/醫學獎得主Craig Mello和Andrew Fire發現,他們能夠將短RNA分子插入到線蟲中并沉默特定基因的表達。今天,研究人員也常常使用這種強大的RNA干擾方法來研究哺乳動物系統中的特定基因功能。 為了進行這種基因沉默實驗,研究人員通常需要依賴化學合成的

    中山大學等開發RNA編輯新工具

      CRISPR-Cas9系統使用一段引導RNA(其與Cas9蛋白結合起來才能發揮作用)來靶定一段DNA,并裂解雙鏈DNA。這一現象提出了一個問題:由一個Dicer結合RNA元件和一段反義RNA組成的一種人造小RNA(asRNA,是否也能用來誘導Dicer處理和降解一段特定的RNA呢?  為此,5月

    強生公布RNAi藥物JNJ-3989雙聯療法和三聯療法臨床數據!

      2019年第70屆美國肝病研究協會(AASLD)年會于11月8-12日在美國波士頓舉行。美國肝病年會(The Liver Meeting)是目前世界上最大、最具權威的肝臟病學會議,每年都有來自世界各地的9000余名肝病學家和從事肝病研究的專業人士前來參會,一起分享探討肝病學領域的突破性研究成果、

    RNAi干擾技術及應用進展研究(二)

    1.2 RNAi的作用特點 (1)“共抑制”性。RNAi是雙鏈RNA介導的轉錄后基因沉默機制,它的啟動子相當活躍,外源基因可以轉錄,但不能正常積累mRNA;RNAi作用不僅使外源基因在轉錄后水平上失活,同時誘導與其同源的內源基因沉默。 (2) 高效性。試驗證明雙鏈RNA干擾m

    Patisiran獲批上市 “沉默”的小核酸藥物曙光乍現?

      上周,世界首例免疫艾滋病基因編輯嬰兒誕生的消息刷屏網絡,隨即引起軒然大波,而基因編輯則是利用生物學手段(如CRISPR/Cas9技術)實現對特定的基因片段的敲除或者修復,技術并非創新且已成熟,但風險仍兼而有之(如脫靶效應、收益與風險問題等),故此已遭多方強烈反對。而基因沉默則是另外一項與基因相關

    基因技術專題-1

    專題一:RNA干擾技術(RNAi)1995年,康奈爾大學的Su Guo博士用反義RNA阻斷線蟲基因表達的試驗中發現,反義和正義RNA都阻斷了基因的表達,他們對這個結果百思不得其解。直到1998年, Andrew Fire的研究證明,在正義RNA也阻斷了基因表達的試驗中,真正起作用的是雙鏈RNA。這些

    前景無法抵擋: RNA藥物刺激生物醫藥公司神經

      RNA藥物技術是近年來新興起的顛覆性的生物醫藥技術,通過關閉致病基因或者誘導免疫應答行使醫藥功能,受到了科研人員、投資者、醫藥和生物技術界的普遍關注,而之前RNA一直被認為是細胞中的垃圾片段,首次引人注目的是2006年Andrew Fire 和Craig Mello教授憑借RNAi干擾技術獲

    RNA干擾實驗技術

    實驗概要本文介紹了RNA干擾的原理及基本實驗方法,包括了siRNA的設計、siRNA的制備和siRNA的轉染等方法,及RNA干擾實驗中的注意事項。實驗原理近年來的研究表明,將與mRNA對應的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導入細胞,可以使mRNA發生特異性的降解,導致其相應的基因

    RNAi的作用機制及siRNA的合成方法(一)

    RNA干擾(RNA interference,RNAi)是由雙鏈RNA(double strandedRNA, dsRNA)分子在mRNA水平關閉相應序列基因表達或使其沉默的過程。dsRNA可以抑制不同類型細胞的靶向基因表達,用特異性的抗體幾乎檢測不到靶向基因所表達的蛋白質。因此,RNAi技術又

    《自然》獲得首創性全基因組RNAi庫

    來自奧地利科學院維也納分子生物學研究院(Institute of Molecular Biotechnology of the Austrian Academy of Sciences)的研究人員以果蠅為研究對象,利用一套完整的基因組序列數據,從達到了88%覆蓋率的蛋白編碼基因中獲得了全基因組范圍內

    RNAi治療新進展: 有望治愈致命遺傳病

    一種siRNA分子(紫色和綠色部分)可能治療遺傳性肝臟疾病   RNA干擾(RNAi),基因沉默技術的一種,顯示了疾病治療的巨大潛力,但從來沒有人能確切證實它對疾病治療所能發揮的作用。但是現在RNAi已經逐漸獲得了研究人員的一致好評。一項新的研究表明,該方法能夠顯著并安全地削弱導致一種罕見的肝臟疾

    抗腫瘤藥物研究及新藥篩選

      提 綱   一、化療藥物的發展   二、腫瘤的藥物治療   三、抗腫瘤藥物篩選及評價   四、體外抗腫瘤活性試驗   五、體內抗腫瘤活性試驗   一、化療藥物的發展   ? 近代腫瘤化療學始于20世紀40年代。   ? 50年代通過動物篩選化療藥物發現了5FU、MTX、CTX等,

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    RNA干擾(轉錄后基因沉默)實驗

    RNA干擾(RNA interference, RNAi)是指在進化過程中高度保守的、由雙鏈RNA(double-stranded RNA,dsRNA)誘發的、同源mRNA高效特異性降解的現象。目前主要用于(1)特異性剔除或關閉特定基因的表達 (2)探索基因功能和傳染性疾病及惡性腫瘤的治療 (3)使

    細胞自噬的研究方法

    正常培養的細胞自噬活性很低,不適于觀察,因此,必須對自噬進行人工干預和調節,經報道的工具藥有: 一、自噬誘導劑  (1) Bredeldin A / Thapsigargin / Tunicamycin :模擬內質網應激(2) Carbamazepine/ L-690,330/

    Autophagy(自噬)

    自噬是近年來很熱門的領域,搜了一下園子,發現沒有這方面系統的介紹或討論,但很多戰友有這方面的疑問,加上本人最近對此也非常感興趣,因此,借本版來專門討論一下自噬(說實在的,自噬屬于丁香園哪一個版塊的范圍我也選不好),與各位同行或有志于研究自噬的戰友共同學習,也歡迎大家提出自己的看法,本人的目的就是交流

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    細胞自噬的研究方法介紹

    正常培養的細胞自噬活性很低,不適于觀察,因此,必須對自噬進行人工干預和調節,經報道的工具藥有:一、自噬誘導劑(1) Bredeldin A / Thapsigargin / Tunicamycin :模擬內質網應激(2) Carbamazepine/ L-690,330/ Lithium Chlor

    Science醫學:推動反義寡核苷酸治療的逆襲

      來自美國加州洛杉磯分校的研究人員發現了一種可使針對杜氏肌營養不良癥(DMD)的反義核苷酸療法變得更為有效的輔助藥物。聯合兩種治療方法將有望顯著減緩這一肌肉消耗性疾病的進展。相關論文發表在12月12日的《科學轉化醫學》(Science Translational Medicine)雜志上。

    誘導JNK組合促進胃癌發生研究進展分析

      胃癌是惡性腫瘤最常見的類型之一,是全球第二大癌癥相關死亡原因。由于早期胃癌具有非特異度癥狀,患者往往晚期才能確診。臨床數據表明,晚期胃癌患者術后5年生存率僅為30%-40%,而早期胃癌則為70%-90%。因此,早期診治是提高患者5年生存率和改善患者預后的重要途徑。目前,胃癌的診斷依賴于內鏡、病理

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