如何利用透析法進行脫鹽濃縮蛋白
二、蛋白質的分離純化蛋白質的分離純化方法很多,主要有:(一)根據蛋白質溶解度不同的分離方法1、蛋白質的鹽析中性鹽對蛋白質的溶解度有顯著影響,一般在低鹽濃度下隨著鹽濃度升高,蛋白質的溶解度增加,此稱鹽溶;當鹽濃度繼續升高時,蛋白質的溶解度不同程度下降并先后析出,這種現象稱鹽析,將大量鹽加到蛋白質溶液中,高濃度的鹽離子(如硫酸銨的SO4和NH4)有很強的水化力,可奪取蛋白質分子的水化層,使之“失水”,于是蛋白質膠粒凝結并沉淀析出。鹽析時若溶液pH在蛋白質等電點則效果更好。由于各種蛋白質分子顆粒大小、親水程度不同,故鹽析所需的鹽濃度也不一樣,因此調節混合蛋白質溶液中的中性鹽濃度可使各種蛋白質分段沉淀。影響鹽析的因素有:(1)溫度:除對溫度敏感的蛋白質在低溫(4度)操作外,一般可在室溫中進行。一般溫度低蛋白質溶介度降低。但有的蛋白質(如血紅蛋白、肌紅蛋白、清蛋白)在較高的溫度(25度)比0度時溶解度低,更容易鹽析。(2)pH值:大多數蛋......閱讀全文
腦脊液蛋白電泳原理和操作
、原理 與血清蛋白電泳相同,利用各種蛋白質在電場作用下遷移率不同來進行檢測。由于CSF蛋白質含量較低,電泳前須進行濃縮處理。一般采用透析法濃縮,將CSF加入透析袋內,置于吸水的透析液中,CSF中的水分移至透析液內,CSF的蛋白質濃度增加后,再進行電泳分析。 2、試劑與器材 (1)器材透析膜可商品化購
簡述阿托伐他汀鈣片的適應癥
一、阿托伐他汀鈣片的性狀:阿托伐他汀鈣片為白色薄膜衣片,除去膜衣顯白色。 二、阿托伐他汀鈣片的適應癥: 1、高膽固醇血癥 原發性高膽固醇血癥患者。包括家族性高膽固醇血癥(雜合子型)或混合型高脂血癥(相當于Fredrickson分類法的IIa和IIb型)患者,如果飲食治療和其他非藥物治療療效
抗原抗體的生物活性
(1)結合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區別,就在于抗體能與相應抗原發生特異性結合,在體內導致生理或病理效應;在體外產生各種直接或間接的可見的抗原抗體結合反應。抗體是靠其分子上的特殊的結合部位與抗原結合的。(2)激活補體:抗體與相應抗原結合后,借助暴露的補體結合點去激活補體系統、激發補體的溶菌
抗原抗體的生物活性
(1)結合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區別,就在于抗體能與相應抗原發生特異性結合,在體內導致生理或病理效應;在體外產生各種直接或間接的可見的抗原抗體結合反應。抗體是靠其分子上的特殊的結合部位與抗原結合的。 (2)激活補體:抗體與相應抗原結合后,借助暴露的補體結合點去激活補體系統、激發補
酶的分子組成
按化學組成不同,可分為單純蛋白酶和結合蛋白酶兩大類。單純蛋白酶類分子僅含氨基酸;而結合蛋白 酶類分子中除蛋白質(成為酶蛋白)外,還含有非蛋白質部分,后者常稱為“輔助因子”,蛋白質部分稱 “酶蛋白”,兩者合并城“全酶”,全酶才具有催化活性。輔助因子可以是金屬離子,也可以是小分子有機化合物,后者根據其與
飛行時間質譜儀的樣品準備
(1)試樣的種類、組分及樣品量 本儀器擅長測定多肽、蛋白質,也可以測定其它生物大分子如多糖、核酸和高分子聚合物、合成寡聚物以及一些相對分子質量較小的有機物,如 C60 或 C60 的接枝物等。 被測樣品可以是單一組分也可以是多組分的,但樣品組分越多,譜圖就越復雜,譜圖分析的難度也越大;如果電離
飛行時間質譜儀對送檢樣品有哪些要求?
(1)試樣的種類、組分及樣品量 本儀器擅長測定多肽、蛋白質,也可以測定其它生物大分子,如,多糖、核酸和高分子聚合物、合成寡聚物以及一些相對分子質量較小的有機物,如,C60或C60的接枝物等。被測樣品可以是單一組分也可以是多組分的,但,樣品組分越多,譜圖就越復雜,譜圖分析的難度也越大;如果電離過
飛行時間質譜儀對樣品的要求
(1)試樣的種類、組分及樣品量本儀器擅長測定多肽、蛋白質,也可以測定其它生物大分子如多糖、核酸和高分子聚合物、合成寡聚物以及一些相對分子質量較小的有機物,如,C60或C60的接枝物等。被測樣品可以是單一組分也可以是多組分的,但樣品組分越多,譜圖就越復雜,譜圖分析的難度也越大;如果電離過程中組分之間存
雙向電泳儀的常見問題
重泡脹后的膠可以不用轉移到另一個電泳槽,直接跑 2D 的一向嗎?一般情況下是可以的。但當上樣量特別大時,可能會有一部分蛋白質沒有被膠條吸收,這樣跑完 1D 和 2D 膠后,會有很多橫向條紋。所以在這種情況下,最好在重泡脹后,將膠條轉移到另外一個電泳漕中進行電泳。為什么我在等電聚焦前加的礦物油在聚焦后
雙向電泳的常見問題解析
重泡脹后的膠可以不用轉移到另一個電泳槽,直接跑 2D 的一向嗎?一般情況下是可以的。但當上樣量特別大時,可能會有一部分蛋白質沒有被膠條吸收,這樣跑完 1D 和 2D 膠后,會有很多橫向條紋。所以在這種情況下,最好在重泡脹后,將膠條轉移到另外一個電泳漕中進行電泳。為什么我在等電聚焦前加的礦物油在聚焦后
凝膠色譜儀的應用
根據凝膠色譜的原理,樣品物質在凝膠色譜柱中的洗脫性質與該物質的分子大小有關。因此選用不同的凝膠色譜柱后,能方便地測定物質的分子量。用此法測定分子量時,可以在各種PH值、離子強度和溫度條件下進行。所測定的物質可以是天然狀態,也可以是變性后的。 實際應用中,可先選用一系列已知分子量的標準樣品在同一色譜條
抗原抗體的生物活性
抗原抗體的主要功能從而有效地清除侵入機體內的微生物、寄生蟲等異物,中和它們所釋放的毒素或清除某些自身抗原,使機體保持正常平衡,但有時也會對機體造成病理性損害,如抗核抗體、抗雙鏈DNA抗體、抗甲狀腺球蛋白抗體等一些自身抗體的產生,對人體可造成危害。(1)結合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區別,就
脂質體的質量控制措施
1、形態、粒徑及其分布采用掃描電鏡、激光散射法或激光掃描法測定。根據給藥途徑不同要求其粒徑不同。如注射給藥脂質體的粒徑應小于200nm,且分布均勻,呈正態性,跨距宜小。2、包封率和載藥量包封率:包封率=(脂質體中包封的藥物/脂質體中藥物總量)×100%一般采用葡聚糖凝膠、超速離心法、透析法等分離方法
脂質體的質量控制
1、形態、粒徑及其分布 采用掃描電鏡、激光散射法或激光掃描法測定。根據給藥途徑不同要求其粒徑不同。如注射給藥脂質體的粒徑應小于200nm,且分布均勻,呈正態性,跨距宜小。 2、包封率和載藥量 包封率:包封率=(脂質體中包封的藥物/脂質體中藥物總量)×100% 一般采用葡聚糖凝膠、超速離心
關于脂質體的質量控制介紹
1、形態、粒徑及其分布 采用掃描電鏡、激光散射法或激光掃描法測定。根據給藥途徑不同要求其粒徑不同。如注射給藥脂質體的粒徑應小于200nm,且分布均勻,呈正態性,跨距宜小。 2、包封率和載藥量 包封率:包封率=(脂質體中包封的藥物/脂質體中藥物總量)×100% 一般采用葡聚糖凝膠、超速離心
使用阿托伐他汀鈣片的劑量信息介紹
1、原發性高膽固醇血癥和混合性高脂血癥的治療 大多數患者服用阿托伐他汀鈣每日一次10毫克,其血脂水平可得到控制。治療2周內可見明顯療效,治療4周內可見顯著療效。長期治療可維持療效。 2、雜合子型家族性高膽固醇血癥的治療 患者初始劑量為每日10mg。應遵循劑量的個體化原則并每4周為時間間隔逐
抗體的生物活性
抗體的生物學活性體現在:(1)特異性結合抗原:抗體本身不能直接溶解或殺傷帶有特異抗原的靶細胞,通常需要補體或吞噬細胞等共同發揮效應以清除病原微生物或導致病理損傷。然而,抗體可通過與病毒或毒素的特異性結合,直接發揮中和病毒的作用。(2)激活補體:IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通過經典途徑激活補
血清γ球蛋白的分離純化與鑒定(凝膠層析法)1
目的要求1.了解蛋白質分離提純的總體思路。2.掌握鹽析法、分子篩層析法、離子交換層析等實驗原理及操作技術。 實驗原理 血清中蛋白質按電泳法一般可分為五類:清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白,其中γ-球蛋白含量約占16%,100ml血清中約含1.2g左右。
酶的分離純化和純度鑒定的實驗方法及其原理
分離蛋白質混合物的各種方法主要是根據蛋白質在溶液中的以下性質:1)分子大小;2)溶解度;3)電荷;4)吸附性質;5)對其它分子的生物學親和力等進行分離. 常見的分離提純蛋白質的方法有:1、鹽析與有機溶劑沉淀:在蛋白質溶液中加入大量中性鹽,以破壞蛋白質的膠體性質,使蛋白質從溶液中沉淀析出,稱為鹽析.常
臨床化學檢查方法介紹腦脊液蛋白電泳介紹
腦脊液蛋白電泳介紹: 腦脊液蛋白電泳主要用于多發性硬化癥,神經梅毒及亞急性硬化性全腦炎等的診斷。腦脊液蛋白電泳正常值: 濾紙法 白蛋白: 0.55-0.69 (55%-69%) 球蛋白α1:0.03-0.08 (3%-8%) α2:0.04-0.09 (4%-9%) β: 0.10-0.18 (
透析袋使用說明
透析即用半透膜(透析袋)將大分子蛋白質分離出來。在生物大分子制備過程中除去鹽、少量有機溶劑、生物小分子雜質和濃縮樣品,透析法最簡便。 ????技術指標:MWCO(截留分子量),單位:Diatoms?。 透析時,小于MWCO的分子在透析膜二邊溶液濃度差產生的擴散壓作用下滲過透析膜,其速度與濃度梯度、膜
二硫鍵作用
二硫鍵二硫鍵(S-S) 是連接不同肽鏈或同一肽鏈的不同部分的化學鍵。它由含硫氨基酸形成,半胱氨酸被氧化成胱氨酸時即形成二硫鍵,二硫鍵是比較穩定的共價鍵,在蛋白質分子中,起著穩定肽鏈空間結構的作用。二硫鍵數目越多,蛋白質分子對抗外界因素影響的穩定性就愈大。二硫鍵disulfide bond反應:2SH
蛋白質分離純化與鑒定的主要方法有哪些
分離蛋白質混合物的各種方法主要是根據蛋白質在溶液中的以下性質:1)分子大小;2)溶解度;3)電荷;4)吸附性質;5)對其它分子的生物學親和力等進行分離.常見的分離提純蛋白質的方法有:1、鹽析與有機溶劑沉淀:在蛋白質溶液中加入大量中性鹽,以破壞蛋白質的膠體性質,使蛋白質從溶液中沉淀析出,稱為鹽析.常用
納米藥物的表征和質量控制(二)
透射電子顯微鏡法(TEM法) 透射電子顯微鏡法是粒子粒徑分析最常用的方法之一,透射電子顯微鏡可觀察和表征納米粒子的形貌和測定粒徑大小。測定時,將納米粒子制成懸浮液并滴在帶碳支持膜的銅網上,待載液如乙醇揮發后,放入樣品臺。每種納米粒子分別選有代表性的A、B和C三組納米群拍攝高倍電鏡像,每張照
蛋白質的鹽析與透析實驗
一、實驗目的(1)掌握蛋白質鹽析沉淀的基本原理與操作。(2)掌握蛋白質透析分離的基本操作。二、實驗原理蛋白質是親水膠體,借助水化膜和同性電荷(在pH7.0的溶液中一般蛋白質帶負電荷)相互排斥作用維持蛋白質膠體的穩定,向蛋白質溶液中加入中性鹽可破壞這些穩定因素,使蛋白質沉淀析出,稱為鹽析。鹽析所得到的
蛋白質的純化及冷凍干燥
蛋白質的基本組成單位是氨基酸,經肽鍵連接而成的結構復雜的生物高分子。根據溶解度可將蛋白質分為清蛋白、球蛋白、谷蛋白、谷醇溶蛋白、組蛋白、魚精蛋白、硬蛋白。蛋白質是怎樣提純?怎樣使用冷凍干燥機凍干?蛋白質提純的方法如:1、根據等電點的不同來純化蛋白質有等電點沉淀法、等電點沉淀和鹽析法聯用法、等電點聚焦
實驗室常用實驗方法介紹濃縮法介紹
一、沉淀法在抽提液中加入適量的中性鹽或有機溶劑,使有效成分變為沉淀。經離心除去不溶物,獲得的上清液通過透析或凝膠過濾脫鹽,即可供純化使用。二、吸附法將干葡聚糖凝膠G25(或吸水棒)加入抽提液中,兩者比例為1:5。由于凝膠吸水之故,抽提液的體積可縮小三倍左右,回收蛋白質量約80%.若凝膠(或吸水棒)對
中藥樣品前處理中的提取方法有哪些
中藥主要來源于天然藥及其加工品,包括植物藥、動物藥、礦物藥及部分化學、生物制品類藥物。 中藥提取方法主要有蒸餾法和溶劑萃取法。蒸餾法包括常壓蒸餾、分餾、水蒸氣蒸餾、真空蒸餾、抽提蒸餾等。水蒸氣蒸餾法又可分為共水蒸餾法、通水蒸氣蒸餾法、水上蒸餾法等。溶劑萃取法是較為有效、應用廣泛的經典方法之一,
單克隆抗體的純化
一、腹水型單抗的純化在單抗純化之前,一般均需對腹水進行預處理,目的是為了進一步除去細胞及其殘渣、小顆粒物質、以及脂肪滴等。常用的方法有二氧化硅吸附法和過濾離心法,以前者處理效果為佳,而且操作簡便。1、二氧化硅吸附法新鮮采集的腹水(或凍存的腹水),2000r/min 15分鐘,除去細胞成分(或
單克隆抗體的純化
一、腹水型單抗的純化?在單抗純化之前,一般均需對腹水進行預處理,目的是為了進一步除去細胞及其殘渣、小顆粒物質、以及脂肪滴等。常用的方法有二氧化硅吸附法和過濾離心法,以前者處理效果為佳,而且操作簡便。?1、二氧化硅吸附法?新鮮采集的腹水(或凍存的腹水),2000r/min 15分鐘,除去細胞成分(