哺乳動物細胞基因突變試驗
哺乳動物體外培養細胞的基因正向突變試驗常用的測試系統有小鼠淋巴瘤L5178Y細胞，中國倉鼠肺V79細胞和卵巢CHO細胞的三個基因位點的突變，即次黃嘌呤磷酸核糖轉移酶(HGPRT)、胸苷激酶(TK)及Na+／K+ATP酶(OUA)位點。HGRPT和Na+/K+ATP酶位點突變可用于上述三種細胞，OUA位點突變僅適用于CHO細胞，HGRPT和TK可分別使6－硫代鳥嘌呤(6－TG)轉移上磷酸核糖及使5－溴脫氧尿苷磷酰化，它們的代謝產物可摻入DNA引起細胞死亡，因此正常細胞在含有這些鹼基類似物的培養基中不能生長，在致突變物作用下此兩個位點發生突變的細胞對這些鹼基類似物具有抗藥性，可以增殖成為克隆(細胞集落)。Na+/K+ATP酶是細胞膜上的Na+/K泵，鳥本苷可抑制此酶活性引起細胞死亡，當致突變物引起該位點突變后，Na+/K+ATP酶對鳥本苷的親和力下降，而酶活性不變，故對培養基中的鳥本苷產生抗藥性，并可增殖為克隆。......閱讀全文
哺乳動物細胞培養過程－－培養條件
哺乳動物細胞培養過程 & 培養條件導語：哺乳動物細胞在培養過程中會經過組織提取，原代培養，傳代培養等過程。傳代培養會根據具體情況分為細胞株培養和細胞系培養。哺乳動物細胞培養過程哺乳動物細胞在培養過程中會經過組織提取，原代培養，傳代培養等過程。傳代培養會根據具體情況分為細胞株培養和細胞系培養。如下對各
實用哺乳動物細胞培養手冊（四）
細胞培養無菌操作基本技術無菌操作技術分為三個部分：工作環境及表面的處理，細胞培養所用玻璃及塑料制品的處理及培養液與培養細胞的處理。工作環境的處理 使用層流超凈工作臺是最經濟有效的手段。超凈工作臺正常工作時，向下的氣流可阻擋外界空氣污染物進入超凈臺。（1）實驗前，無菌室及無菌操作臺用紫外燈照射 30-
實用哺乳動物細胞培養手冊（中）
細胞培養環境1、實驗室設計 細胞培養是一種無菌操作技術，要求工作環境和條件必須保證無微生物污染和不受 其它有害因素的影響。細胞培養室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響， 要求工作環境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細胞培養室的設計原則一般是無菌 操作區設在室內較少走動的內側，常規操作和封閉培養于
實用哺乳動物細胞培養手冊（六）
緩沖系統大多數細胞所需 pH 在 7.2 - 7.4。但是，細胞培養最適 pH 值隨培養的細胞種類不同而 不同。成纖維細胞喜歡較高 pH (7.4 - 7.7), 而傳代轉化細胞系則需要偏酸 pH (7.0 - 7.4)。 由于多數培養液靠碳酸氫鈉（NaHCO3）與 CO2 體系進行緩沖，因
哺乳動物細胞體外剪接分析實驗
剪接反應的典型做法是使用核提取物，即 S100 提取物補充 SR 蛋白或粗提取物的部分純化組分，最常使用的是 HeLa 細胞的提取物。前體 mRNA 底物通常采用噬菌體聚合酶體外轉錄的方法來制備。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編：鄭曉飛。實驗方法原理剪接反應的典型做法是使用核提取物，即 S10
實用哺乳動物細胞培養手冊（上）
細胞培養基本概念細胞培養是指從體內組織取出細胞在體外模擬體內環境下，使其生長繁殖，并維持其結 構和功能的一種培養技術。細胞培養的培養物可以是單個細胞，也可以是細胞群。細胞培養目的與用途1、科學研究：藥物研究開發與基礎研究 藥物研究與開發(1) 新藥篩選：如化學合成藥物藥效研究、中藥有效成分篩選與鑒定
實用哺乳動物細胞培養手冊（二）
消化液：分離組織和分散細胞。常用的有胰蛋白酶和二乙胺四乙酸二鈉 (EDTA) 兩種溶液。可以 單獨使用，也可以混合使用。（1）胰蛋白酶溶液胰蛋白酶（簡稱胰酶）是一種黃白色粉末，易潮解，應放置冷暗干燥處保存。目前應用的胰蛋白酶主要來自牛或豬的胰腺。胰酶的主要作用是使細胞間的蛋白質水解，使細胞相
哺乳動物細胞體外剪接分析實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 剪接反應的典型做法是使用核提取物，即 S100 提取物補充 SR 蛋白或粗提取物的部分純化組分，最常使用的是 HeLa 細胞的提取物。前體 mRNA 底物通常采用噬菌體聚合酶體外轉錄的方法來制備。
哺乳動物細胞體外剪接分析實驗
實驗方法原理 剪接反應的典型做法是使用核提取物，即 S100 提取物補充 SR 蛋白或粗提取物的部分純化組分，最常使用的是 HeLa 細胞的提取物。前體 mRNA 底物通常采用噬菌體聚合酶體外轉錄的方法來制備。實驗材料 前體 mRNA 底物試劑、試劑盒 ATP CP 混合物HEPES-KOH聚乙烯醇
哺乳動物細胞的RNAi技術策略(3)
5. si 表達框架si 表達框架(si expression cassettes，SECs)是一種由PCR得到的si 表達模版，能夠直接導入細胞進行表達而無需事前克隆到載體中。這個方法最早是由Castanotto和其同事(5)采用，包括一個 pol III啟動子，一段發夾結構si ，一個
體外哺乳類細胞（V79/HGPRT）基因突變試驗
－ 中華倉鼠肺細胞染色體突變實驗藥物毒理體外經典實驗。國家都有標準了就可以想象重要性了。自己做了一個PDF文件，方便大家收藏。中華人民共和國國家標準GB 15193．12一91體外哺乳類細胞（V79/HGPRT）基因突變試驗V79/HGPRT gene mutation test----------
哺乳動物細胞實驗室的構建方案
一、實驗室設計細胞培養是一種無菌操作技術，要求工作環境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。細胞培養室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細胞培養室的設計原則一般是無菌操作區設在室內較少走動的內側，常規操作和封閉培養于一室，為10萬級潔凈
哺乳動物細胞實驗室的構建方案
一、實驗室設計 細胞培養是一種無菌操作技術，要求工作環境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。細胞培養室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細胞培養室的設計原則一般是無菌操作區設在室內較少走動的內側，常規操作和封閉培養于一室，為10萬
2.1.3－哺乳動物細胞胞質RNA的分離
下述方法是純化組織培養細胞胞質 RNA 的 簡便并行之冇效的方法 ，此方法出現在 RNA 分離的較早階段，主要步驟即離心去除細胞核試劑、試劑盒冰冷的磷酸鹽緩沖液NaClKClNa2HP04?7H20KH2PO4冰冷的裂解緩沖液： LTris-HClNaClMgCL2NkmidetP-40胎盤RNas
體外哺乳類細胞基因突變（HGPRT）試驗原理及注意事項
體外哺乳動物細胞基因突變試驗是利用培養的哺乳動物細胞作指示生物的體外遺傳毒理學試驗，可用于檢測有化學物質誘導的基因突變，適用的細胞系包括小鼠淋巴瘤細胞（L5178Y），中國倉鼠肺細胞（V79），中國倉鼠卵巢細胞（CHO），人類淋巴母細胞（TK6）等。這些細胞系，常用的遺傳學終點是檢測胸苷激酶（TK）
哺乳動物細胞培養有沒有厭氧的
哪有厭氧的哺乳動物啊開放培養時一般把細胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環境中,此濃度的CO2與培養液PH緩沖體系中的NaHCO3濃度相平衡,二氧化碳既是細胞代謝產物,也是細胞生長繁殖所需成分,它在細胞培養中的主要作用在于維持培養基的pH值
Nature子刊：活哺乳動物細胞的靶向輸送
拜羅伊特大學和布里斯托爾大學開發的一種新型多肽非常適合于將分子(如活性物質和染料)定向輸送到哺乳動物細胞中。這種肽具有雙重功能:它可以從細胞外部進入細胞，并與另一種肽相互作用。配對肽必須事先被放置在細胞內被運輸的分子發揮作用的地方。該運輸系統發表在《Nature Chemical Biology》雜
用纏繞法從哺乳動物細胞中分離DNA
實驗方法原理 本方法由 Bowtell 法（1987) 改進而成，可同時從許多不同細胞或者組織樣品中制備 DNA。本方案中的主要步驟包括將 DNA 沉淀在細胞裂解液和乙醇的交界面上，接著將沉淀的 DNA 纏繞到一個 Shepherd 氏鉤上。纏在鉤上的 DNA 從乙醇溶液中轉出溶于所選擇
蛋白質在哺乳動物細胞中表達實驗
實驗方法原理 實驗材料 載體（如 CDM 8）實驗步驟 1. 將目的基因亞克隆至合適的載體中得到所需的重組 DNA 。用小量法（5 ml 培養液）或用 CsCl／溴化乙錠離心法純化重組 DNA。2. 在轉染的前一天，將 COS-7 細胞以約 20% 匯片的數量種入含 DMEM-2 CS 培養基的 1
哺乳動物細胞(mammalian－cell)總RNA的分離2
3）于0℃以5000g離心10分鐘沉淀RNA，棄上清，用含0.1mol/L 乙酸鈉（pH5.2）的70％乙酸洗滌沉淀，用自動微量移液器盡可能將乙醇吸盡， 隨后于室溫放置幾分鐘，晾干沉淀。切勿抽干沉淀，因為干的核酸沉淀很難溶解。4）每個直徑為90mm的培養皿或每107細胞加 200μl 50mmol/
哺乳動物細胞(mammalian－cell)總RNA的分離1
哺乳動物細胞總ＲＮＡ的分離細胞的裂解提取步驟注意事項這一從培養的單層哺乳動物細胞中分離RNA的實驗程序系為Favaloro 等（1980）所介紹程序的改良。該程序同樣適用于從懸浮培養的哺乳動物細胞中或從易于分散成單個細胞的哺乳動物組織中分離 RNA。但不適用于從固體組織中提取RNA，因為用這
用纏繞法從哺乳動物細胞中分離DNA
實驗方法原理本方法由 Bowtell 法（1987) 改進而成，可同時從許多不同細胞或者組織樣品中制備 DNA。本方案中的主要步驟包括將 DNA 沉淀在細胞裂解液和乙醇的交界面上，接著將沉淀的 DNA 纏繞到一個 Shepherd 氏鉤上。纏在鉤上的 DNA 從乙醇溶液中轉出溶于所選擇的液體緩沖液。
蛋白質在哺乳動物細胞中表達實驗
實驗材料載體（如 CDM 8）實驗步驟1. 將目的基因亞克隆至合適的載體中得到所需的重組 DNA 。用小量法（5 ml 培養液）或用 CsCl／溴化乙錠離心法純化重組 DNA。2. 在轉染的前一天，將 COS-7 細胞以約 20% 匯片的數量種入含 DMEM-2 CS 培養基的 100 mm 培養皿
蛋白質在哺乳動物細胞中表達實驗
基本方案 用COS細胞瞬時表達 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 載體（如 CD
用纏繞法從哺乳動物細胞中分離DNA
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本方法由 Bowtell 法（1987) 改進而成，可同時從許多不同細胞或者組織樣品中制備 DNA。本方案中的主要步驟包括將 DNA 沉淀在細胞裂解液和乙醇的交界面上，接著將沉淀的 DNA 纏繞到一個 Shepherd 氏鉤
哺乳動物細胞的實驗室的培養器皿
常用細胞培養器皿有培養瓶、培養板、培養皿等。常準備量是使用量的三倍。器 皿應選擇透明度好、無毒、利于細胞粘附和生長的材料，常用一次性聚苯乙烯材料制品 或中性硬度玻璃制品。常用的器皿有下面幾種。 （1）液體儲存瓶：用于儲存各種配制好的培養液、血清等液體，常用規格有500ml、250ml、
體外哺乳類細胞基因突變（HGPRT）試驗原理及注意事項3
結果評價：陽性結果的判定：受試物組在任何一個劑量條件下的突變頻率為陰性（溶媒）對照組的3倍或3倍以上，可判定為陽性。受試物組的突變頻率增加，與陰性（溶媒）對照組比較具有統計學意義，并有劑量-反應趨勢，則可判定為陽性。受試物組在任何一個劑量條件下引起具有統計學意義的增加并有可重復性，則可判定為陽性。陰
體外哺乳類細胞基因突變（HGPRT）試驗原理及注意事項2
三、試驗步驟和觀察指標貼壁生長細胞的試驗步驟和觀察指標：1、細胞準備：將5×105 個細胞接種于直徑為10 mm平皿中，于37℃、5%二氧化碳培養箱中培養24h。2、接觸受試物：吸去培養液，PBS洗兩次，加人一定量的無血清培養液、一定濃度的受試物及S9混合物(無需代謝活化者用無血清培養液補足），置于
體外哺乳類細胞基因突變（HGPRT）試驗原理及注意事項1
In vitro Mammalian Cell Gene Mutation Test【試驗原理】體外哺乳動物細胞基因突變試驗是利用培養的哺乳動物細胞作指示生物的體外遺傳毒理學試驗，可用于檢測有化學物質誘導的基因突變，適用的細胞系包括小鼠淋巴瘤細胞（L5178Y），中國倉鼠肺細胞（V79），中國倉鼠卵
我國科學家繪制出首個哺乳動物細胞圖譜
浙江大學醫學院干細胞與再生醫學中心郭國驥教授團隊研發出低成本、高效率、完全國產化的高通量單細胞測序平臺“Microwell-seq”，并在短時間內利用這一平臺構建全球首個哺乳動物的細胞圖譜。該成果于23日刊登在國際學術期刊《細胞》雜志上。 細胞是生命最小的獨立遺傳單位。傳統的測序技術“看”的是