細胞融合技術的融合方法介紹
同種細胞在培養時2個靠在一起的細胞自發合并,稱自發融合;異種間的細胞必須經誘導劑處理才能融合,稱誘發融合。仙臺病毒法融合①兩種細胞在一起培養,加入病毒,在4℃條件下病毒附著在細胞膜上。并使兩細胞相互凝聚;②在37℃中,病毒與細胞膜發生反應,細胞膜受到破環,此時需要Ca2+和Mg2+,最適PH為8.0一8.2;③細胞膜連接部穿通,周邊連接部修復,此時需Ca2+和ATP;④融合成巨大細胞,仍需ATP。聚乙二醇(PEG)法聚乙二醇(PEG)結構為:HOH2C(CH20CH2)nCH2OH,分子量大于200小于6000者均可用作細胞融合劑。PEG經高壓滅菌后,與溫熱的Engle氏液混合。一般選用分子量為4,000,常用濃度為50%,pH8.0~pH8.2(用10%NaHCO3調整),分子量小的PEG,融合效應差,又有毒性,分子量過大,則粘性太大,不易操作。電融合法在直流電脈沖的誘導下,細胞膜表面的氧化還原電位發生改變,使異種細胞粘合并發......閱讀全文
細胞融合技術的應用價值
細胞融合不僅可用于基礎研究,而且還有重要的應用價值,在植物育種方面已經成功的有蘿卜+甘藍、粉藍煙草+郎氏煙草、番茄+馬鈴薯等等。細胞融合另一個重要應用就是制備單克隆抗體。單克隆抗體可以用作診斷試劑,治療疾病和運載藥物,具有準確,高效,簡易,快速等優點。
細胞融合技術的前期發現
人們很早就注意到了在自然條件下發生的細胞融合現象,首先在病料組織中發現了由細胞融合產生的多核細胞,緊接著發現在脊椎動物和無脊椎動物的正常細胞中也可發生細胞融合,隨后在體外組織培養中也發現了離體細胞的融合現象。自從發現活病毒可在體內介導癌細胞融合后,人們又實現了利用滅活病毒促進動物異種細胞融合,從而打
細胞融合技術的成功案例
生物種類細胞來源甘藍—青菜葉—根大豆—馬唐草愈傷組織—葉矮牽牛—龍面花葉—花瓣大麥—花生種子—種子大麥—大豆葉—懸浮細胞小麥—矮牽牛葉—花瓣油菜—大豆葉—懸浮細胞玉米—大豆葉—懸浮細胞大豆—野豌豆懸浮細胞—懸浮細胞大麥—蠶豆葉—根大豆—香草木犀懸浮細胞—葉酵母菌—雞原生質體—血紅細胞大豆—煙草懸浮細
細胞融合技術的發展歷程
19世紀30年代,科學家們相繼在肺結核,天花,水痘,麻疹等疾病患者的病理組織中觀察到多核細胞。19世紀70年代,科學家們在蛙的血細胞中也看到了多核細胞的現象,但是當時科學發展水平的限制,沒有給予足夠重視。1962年,日本科學家發現日本血凝型病毒能引起艾氏腹水瘤細胞融合的現象。1965年,英國科學家進
細胞融合技術仙臺病毒法融合
仙臺病毒法融合①兩種細胞在一起培養,加入病毒,在4℃條件下病毒附著在細胞膜上。并使兩細胞相互凝聚;②在37℃中,病毒與細胞膜發生反應,細胞膜受到破環,此時需要Ca2+和Mg2+,最適PH為8.0一8.2;③細胞膜連接部穿通,周邊連接部修復,此時需Ca2+和ATP;④融合成巨大細胞,仍需ATP。
細胞融合的融合過程
細胞膜有內外兩層,細胞融合首先發生在外層,然后再到內層,由此就出現了兩種融合通道,細胞體內物質通過這兩種通道轉移。病毒膜與目標細胞融合時,只出現一種融合通道,即導致融合的基因只能在病毒中找到,而在目標細胞中卻找不到。但是,通過EFF-1發生的細胞融合則是一個雙向融合過程,需要EFF-1出現在兩個
動物細胞融合的方法
誘導細胞融合的方法有三種:生物方法(病毒)、化學方法(聚乙二醇PEG)、物理方法(離心,震動,電刺激)。某些病毒如:仙臺病毒、副流感病毒和新城雞瘟病毒的被膜中有融合蛋白(fusion protein),可介導病毒同宿主細胞融合,也可介導細胞與細胞的融合,因此可以用紫外線滅活的此類病毒誘導細胞融合。化
促進細胞融合的最好方法
可以用PEG處理,原理現在只有模糊的解釋,是由于PEG的溶劑性使細胞膜融合在一起可以用電刺激,雖然不太適合動物細胞,是通過電穿孔使細胞膜出現幾十納米的通道可以用滅活的仙臺病毒,原理更不清楚,據說可能是由于病毒上的某些蛋白介導.由于可能會造成其他的效應,所以用的也不多一般情況下是用PEG處理的方法
細胞融合的方法有哪些?
細胞融合的方法有物理法,如電融合、激光融合,化學融合法和生物融合法,如滅活的仙臺病毒,此處例舉化學融合法中的一種即聚乙二醇融合法。聚乙二醇(PEG),在分子量為200~700時,呈無色、無臭的粘稠狀液體,分子量大于1000時,呈乳白色蠟狀固體,能溶于水、乙醇及其他許多有機溶劑,對熱穩定,與許多化學藥
動物細胞融合的方法
誘導細胞融合的方法有三種:生物方法(病毒)、化學方法(聚乙二醇PEG)、物理方法(離心,震動,電刺激)。某些病毒如:仙臺病毒、副流感病毒和新城雞瘟病毒的被膜中有融合蛋白(fusion protein),可介導病毒同宿主細胞融合,也可介導細胞與細胞的融合,因此可以用紫外線滅活的此類病毒誘導細胞融合。化
細胞融合的方法有哪些
一、細胞融合的方法有三種:生物方法、化學方法、物理方法。二、細胞融合也稱細胞雜交?,?是指細胞通過介導和培養,?在離體條件下用人工方法將不同種的細胞通過無性方式融合(?合并)?成一個核或多核的雜合細胞的過程。體細胞融合后可形成四倍體或多倍體細胞,由此形成的雜交細胞,其特性會有很大的變化。三、化學誘導
細胞融合技術仙臺病毒法融合法
①兩種細胞在一起培養,加入病毒,在4℃條件下病毒附著在細胞膜上。并使兩細胞相互凝聚;②在37℃中,病毒與細胞膜發生反應,細胞膜受到破環,此時需要Ca2+和Mg2+,最適PH為8.0一8.2;③細胞膜連接部穿通,周邊連接部修復,此時需Ca2+和ATP;④融合成巨大細胞,仍需ATP。
細胞融合技術離心振動法
物理方法之一,使用離心機等機器實現細胞之間的融合。
細胞融合技術物理振動法
離心振動物理方法之一,使用離心機等機器實現細胞之間的融合。
細胞融合
一、原理????細胞融合(Cell fusion),即在自然條件下或用人工方法(生物的、物理的、化學的)使兩個或兩個以上的細胞合并形成一個細胞的過程。人工誘導的細胞融合,在六十年代作為一門新興技術而發展起來。由于它不僅能產生同種細胞融合,也能產生種間細胞的融合,因此細胞融合技術目前被廣泛應用于細胞生
細胞融合
一、原理????細胞融合(Cell fusion),即在自然條件下或用人工方法(生物的、物理的、化學的)使兩個或兩個以上的細胞合并形成一個細胞的過程。人工誘導的細胞融合,在六十年代作為一門新興技術而發展起來。由于它不僅能產生同種細胞融合,也能產生種間細胞的融合,因此細胞融合技術目前被廣泛應用于細胞生
細胞融合技術的發展和研究
19世紀30年代,科學家們相繼在肺結核,天花,水痘,麻疹等疾病患者的病理組織中觀察到多核細胞。19世紀70年代,科學家們在蛙的血細胞中也看到了多核細胞的現象,但是當時科學發展水平的限制,沒有給予足夠重視。1962年,日本科學家發現日本血凝型病毒能引起艾氏腹水瘤細胞融合的現象。1965年,英國科學家進
細胞融合技術的臨床意義
⒈理論上說任何細胞,都有可能通過體細胞雜交而成為新的生物資源。這對于種質資源的開發和利用具有深遠的意義。⒉融合過程不存在有性雜交過程中的種性隔離機制的限制,為遠緣物種間的遺傳物質交換提供了有效途徑。⒊體細胞雜交產生的雜種細胞含有來自雙親的核外遺傳系統,在雜種的分裂和增殖過程中雙親的葉綠體、線粒體DN
關于細胞融合的基本介紹
細胞融合(cell fusion),細胞遺傳學名詞,是在自發或人工誘導下,兩個細胞或原生質體融合形成一個雜種細胞。基本過程包括細胞融合形成異核體(heterokaryon)、異核體通過細胞有絲分裂進行核融合、最終形成單核的雜種細胞。細胞融合可作為一種實驗方法被廣泛適用于單克隆抗體的制備,膜蛋白的
關于細胞融合的過程介紹
細胞膜有內外兩層,細胞融合首先發生在外層,然后再到內層,由此就出現了兩種融合通道,細胞體內物質通過這兩種通道轉移。病毒膜與目標細胞融合時,只出現一種融合通道,即導致融合的基因只能在病毒中找到,而在目標細胞中卻找不到。但是,通過EFF-1發生的細胞融合則是一個雙向融合過程,需要EFF-1出現在兩個
細胞融合的誘導物介紹
細胞融合的誘導物種類很多.常用的主要有生物法用滅活的仙臺病毒(Sendai virus),化學法如用聚乙二醇(Polyethyleneglycol,PEG)和物理法如電脈沖,振動、離心、電激。目前應用最廣泛的是聚乙二醇,因為它易得、簡便,且融合效果穩定。PEG的促融機制尚不完全清楚,它可能引起細胞膜
細胞融合的誘導物介紹
細胞融合的誘導物種類很多.常用的主要有生物法用滅活的仙臺病毒(Sendai virus),化學法如用聚乙二醇(Polyethyleneglycol,PEG)和物理法如電脈沖,振動、離心、電激。目前應用最廣泛的是聚乙二醇,因為它易得、簡便,且融合效果穩定。PEG的促融機制尚不完全清楚,它可能引起細胞膜
細胞融合的融合過程簡述
細胞膜有內外兩層,細胞融合首先發生在外層,然后再到內層,由此就出現了兩種融合通道,細胞體內物質通過這兩種通道轉移。病毒膜與目標細胞融合時,只出現一種融合通道,即導致融合的基因只能在病毒中找到,而在目標細胞中卻找不到。但是,通過EFF-1發生的細胞融合則是一個雙向融合過程,需要EFF-1出現在兩個相互
關于單克隆抗體技術的細胞融合的介紹
首先制備細胞培養基、 氨基喋呤(A)貯存液、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷(HT)貯存液等各種細胞生長所需的營養物質。然后制備髓瘤細胞和脾淋巴細胞,之后進行細胞融合。在細胞融合后選擇性培養過程中,由于大量骨髓瘤細胞和脾細胞相繼死亡,此時單個或少數分散的雜交瘤細胞多半不易存活,通常必須加入其他活細胞使之繁
動物細胞融合的方法原理及用途介紹
方法:物理法:電刺激,振動,離心。化學法:聚乙二醇(PEG)強烈的吸水性,有凝聚蛋白質的作用。病毒法:紫外線照射后滅活仙臺病毒,喪失了感染活性,保留了融合活性原理:細胞膜的流動性。用途及意義:制備單克隆抗體。
誘導動物細胞融合的方法
在體外培養條件下,動物細胞會自發融合,但是頻率極低。因此,一般都需要添加具有誘導細胞融合效應的生物或化學藥劑,或者采用電融合技術,人為地促進細胞融合。 病毒誘導融合 病毒是最早采用的融合劑。常用于誘導動物細胞融合的病毒有仙臺病毒、新城雞瘟病毒、皰疹病毒等,其中仙臺病毒最常用
誘導動物細胞融合的方法
在體外培養條件下,動物細胞會自發融合,但是頻率極低。因此,一般都需要添加具有誘導細胞融合效應的生物或化學藥劑,或者采用電融合技術,人為地促進細胞融合。 病毒誘導融合 病毒是最早采用的融合劑。常用于誘導動物細胞融合的病毒有仙臺病毒、新城雞瘟病毒、皰疹病毒等,其中仙臺病毒最常用
細胞融合的實驗操作方法
(以人鼠細胞雜交為例)人、鼠細胞融合實驗分三步進行∶首先用熒光染料標記抗體∶將小鼠的抗體與發綠色熒光的熒光素(fluorescin)結合,人的抗體與發紅色熒光的羅丹明(rhodamine)結合;第二步是將小鼠細胞和人細胞在滅活的仙臺病毒的誘導下進行融合;最后一步將標記的抗體加入到融合的人、鼠細胞中,
誘導動物細胞融合的方法
在體外培養條件下,動物細胞會自發融合,但是頻率極低。因此,一般都需要添加具有誘導細胞融合效應的生物或化學藥劑,或者采用電融合技術,人為地促進細胞融合。 病毒誘導融合? 病毒是最早采用的融合劑。常用于誘導動物細胞融合的病毒有仙臺病毒、新城雞瘟病毒、皰疹病毒等,其中仙臺病毒最常用。用作融合劑的病毒必須事
誘導細胞融合的方法有哪些
在體外培養條件下,動物細胞會自發融合,但是頻率極低。因此,一般都需要添加具有誘導細胞融合效應的生物或化學藥劑,或者采用電融合技術,人為地促進細胞融合。1.病毒誘導融合??病毒是最早采用的融合劑。常用于誘導動物細胞融合的病毒有仙臺病毒、新城雞瘟病毒、皰疹病毒等,其中仙臺病毒最常用。用作融合劑的病毒必須