關于單克隆抗體有限稀釋法克隆法介紹
1．材料 （1）微量培養盤，盤內各孔于克隆化前一天培養小鼠腹腔細胞（即飼養細胞）每孔2萬～4萬。 （2）HT培養基 2．操作方法 （1）取出抗體陽性孔細胞，用HT培養液制成細胞懸液。并取樣進行臺盼蘭染色，計數。 （2）用HT培養液將細胞稀釋成200個/ml、40個/ml、20個/ml和的懸液。 （3）用吸管將細胞懸液分別種入微量培養盤，每孔0.05ml，細胞含量分別為10個/孔、2個/孔、1個/孔和0.5個/孔。 （4）5%CO2飽和濕度，37℃培養。 （5）每天用倒置顯微鏡觀察克隆生長情況，選擇只有一個集落生長的孔，棄掉兩個以上和沒有細胞生長的孔。 （6）克隆大量繁殖后，布滿孔底的1/3～1/2時，測培養液抗體。 （7）抗體陽性孔細胞，移到有飼養層的組織培養瓶中，并傳2～4代就可以脫離飼養細胞，建成克隆株。......閱讀全文
關于單克隆抗體有限稀釋法克隆法介紹
1．材料 （1）微量培養盤，盤內各孔于克隆化前一天培養小鼠腹腔細胞（即飼養細胞）每孔2萬～4萬。 （2）HT培養基 2．操作方法 （1）取出抗體陽性孔細胞，用HT培養液制成細胞懸液。并取樣進行臺盼蘭染色，計數。 （2）用HT培養液將細胞稀釋成200個/ml、40個/ml、20個/ml和
單克隆抗體的克隆化方法有限稀釋法介紹
1．材料（1）微量培養盤，盤內各孔于克隆化前一天培養小鼠腹腔細胞（即飼養細胞）每孔2萬～4萬。（2）HT培養基2．操作方法（1）取出抗體陽性孔細胞，用HT培養液制成細胞懸液。并取樣進行臺盼蘭染色，計數。（2）用HT培養液將細胞稀釋成200個/ml、40個/ml、20個/ml和的懸液。（3）用吸管將細
單克隆抗體技術：克隆化(有限稀釋法、軟瓊脂克隆化、...
經過抗體測定的陽性孔，可以擴大培養，進行克隆，以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體。克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。?克隆化的陽性雜交瘤細胞，經
有限稀釋法克隆抗體的過程介紹
1．材料（1）微量培養盤，盤內各孔于克隆化前一天培養小鼠腹腔細胞（即飼養細胞）每孔2萬～4萬。（2）HT培養基2．操作方法（1）取出抗體陽性孔細胞，用HT培養液制成細胞懸液。并取樣進行臺盼蘭染色，計數。（2）用HT培養液將細胞稀釋成200個/ml、40個/ml、20個/ml和的懸液。（3）用吸管將細
有限稀釋法的基本介紹
有限稀釋法是一種常用的克隆方法，是指將需要再克隆的細胞株自培養孔內吸出并作細胞計數，計出1mL的細胞數。常用來篩選融合的動物細胞。 用HT培養液稀釋， 使細胞濃度為50～60個/mL，于96孔培養板中每孔加0.1mL(5.5個細胞/孔)。接種2排，剩余細胞懸液用HT培養液作倍比稀釋，再接種2排
細胞單克隆的分離方法（有限稀釋法與軟瓊脂法）
一、有限稀釋法材料：a、96孔細胞培養板等；b、HT培養基；c、活力強的雜交瘤細胞；d、小鼠腹腔細胞。方法：a、制備小鼠腹腔細胞。同“細胞融合”一節中的方法。b、制備待克隆的雜交瘤細胞懸液，用含20%血清的HT培養基稀釋至每毫升含2.5、15和50個細胞三種不同的稀釋度。c、按每毫升加入5×104-
稀釋法克隆培養
實驗方法原理低密度接種細胞，培養至集落形成，細胞染色（用于克隆形成率和存活檢測 ) 或用于篩選時分離細胞、然后擴增為細胞株。實驗材料CHO細胞胰蛋白酶儀器、耗材培養基吸管培養皿血細胞計數器實驗步驟1. 細胞用胰蛋白酶（胰蛋白酶，0.25 %，1 : 250或相當活性）消化制備單細胞懸液。消化不充分會
稀釋法克隆培養
實驗方法原理低密度接種細胞，培養至集落形成，細胞染色（用于克隆形成率和存活檢測 ) 或用于篩選時分離細胞、然后擴增為細胞株。實驗材料CHO細胞 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?胰蛋白酶 ? ? ? ?
稀釋法克隆培養
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 低密度接種細胞，培養至集落形成，細胞染色（用于克隆形成率和存活檢測 ) 或用于篩選時分離細胞、然后擴增為細胞株。 實驗材料 CHO細胞
單－克－隆－抗－體－的－制－備——有限稀釋克隆法
實驗步驟?附 加 材 料（其他材料見基本方案 2)候 選 雜 交 瘤 系（見輔助方案 2)克隆和擴增用培養基（見輔助方案 4)微 孔 板 觀 察 鏡（由 Flow 實驗室或 Dynatech 公司提供），可選的1.重懸候選雜交瘤所在孔中的細胞（見 輔 助 方 案 2 , 步 驟 4)，用血細胞計數器
單克隆抗體的顯微鏡操作克隆法介紹
在直徑6cm培養皿中，加入1ml1.0×108細胞懸液放置5%CO2飽和濕度，37℃溫箱中放置30min以上，倒置顯微鏡下，尋找那些與周圍相距甚遠的單個細胞，將毛細管口（一頭有直角彎頭毛細管，一頭連接一尺長乳膠管，用口控制液體進入）水平置放于液面上，左右微動，直到看見管口，對準細胞，吸入毛細管，
單克隆抗體的克隆化方法軟瓊脂平板法介紹
軟瓊脂克隆化借助撒在軟瓊脂上單個細胞定位生長，而達到克隆化，具體操作如下：1．配2.5%的瓊脂糖30ml，水浴溶化后，移入45℃水浴中。2．將117ml完全DMEM液和3ml10倍濃度的DMEM液混合，置45℃水浴預熱。3．將瓊脂糖與DMEM液混合，即為含0.5%瓊脂糖的完全DMEM液，并加75×1
單克隆抗體的克隆化方法熒光激活分離法介紹
用一種熒光激活細胞分類器（FluoresceinActivafedCellSorter，FACS）。其基本原理是：將細胞經熒光抗體染色后，經噴嘴形成單個細胞的線形液滴，在萊塞光激發下，熒光素發射熒光，此信號由光電倍增管接收，再結合細胞形態大小產生光散射信號，經電腦處理，產生信號并與預定的信號對比，根
關于單克隆抗體的克隆方法介紹
1．配2.5%的瓊脂糖30ml，水浴溶化后，移入45℃水浴中。 2．將117ml完全DMEM液和3ml10倍濃度的DMEM液混合，置45℃水浴預熱。 3．將瓊脂糖與DMEM液混合，即為含0.5%瓊脂糖的完全DMEM液，并加75×108脾細胞。 4．每塊平皿加10ml，于室溫中凝固。 5．
關于藥敏試驗的稀釋法的介紹
稀釋法藥敏試驗可用于定量測試抗菌藥物對某一細菌的體外活性，分為瓊脂稀釋法和肉湯稀釋法。實驗時，抗菌藥物的濃度通常經過倍比（lg2）稀釋，能抑制待測菌肉眼可見生長的最低藥物濃度成為最小抑菌濃度（MIC），一個特定抗菌藥物的測試濃度范圍應該包含能夠檢測細菌的解釋性折點（敏感、中介和耐藥）的濃度，同時
關于稀釋法藥敏試驗的基本介紹
稀釋法藥敏試驗是指將一定濃度的抗菌藥物按照指南進行稀釋后與肉湯或瓊脂混合制成培養基，再接種受試菌株，經孵育培養后觀察細菌生長情況，進行藥敏結果分析。此法較少應用于臨床檢測，多用于罕見耐藥的調查。在肉湯或瓊脂中將抗菌藥物進行一系列（對倍）稀釋后，定量接種待檢菌，35攝氏度孵育24小時后觀察。抑制待
關于稀釋法藥敏試驗的步驟介紹
稀釋法藥敏試驗主要有試管肉湯稀釋法、微量肉湯稀釋法、瓊脂稀釋法等方法，其主要區別為培養基不同，但試驗步驟基本一致。 1.藥物稀釋 按照美國臨床和實驗室標準協會（CLSI）制訂的指南進行藥物原液制備和稀釋。 2.菌液制備 挑取培養好的受試菌制備成0.5麥氏單位菌懸液。 3.菌株接種 菌
關于同位素稀釋法的應用介紹
同位素稀釋法已廣泛用于生物化學方面，如維生素、抗生素等復雜物質的分析；有機化學方面，如氨基酸、脂肪酸、殺蟲劑、聚合物等復雜混合物的分析；無機化學方面，特別是對性質類似不易分離的稀土元素的定量測定。
關于單克隆抗體的定義介紹
單克隆抗體是人工制備的雜交瘤細胞生產的，雜交瘤細胞是由一個經抗原激活后的B細胞與一個骨髓瘤細胞融合形成。單克隆抗體優點：純度高，靈敏度高，特異性強，交叉反應少，制備的成本低。缺點：對技術有一定的要求，而且通過抗原的化學處理很容易丟失表位 [1] ?。
關于單克隆抗體的基本介紹
單克隆抗體是由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術來制備，雜交瘤（hybridoma）抗體技術是在細胞融合技術的基礎上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。 用具備這種特性的單個雜交瘤細胞培養成細胞群，
關于單克隆抗體的內容介紹
解決多克隆抗體特異性不高的理想方法是制備識別單一表位特異性的抗體。如果能獲得僅針對單一表位的漿細胞克隆，并使其在體外擴增分泌抗體，就有可能獲得單一表位特異性的抗體。然而，漿細胞在體外的壽命較短，難以培養。為克服這一缺點，Kohler和Milstein將可產生特異性抗體但短壽的B細胞與不產生抗體但
關于單克隆抗體技術的介紹
一種免疫學技術，將產生抗體的單個B淋巴細胞同骨髓腫瘤細胞進行細胞融合， 獲得既能產生抗體， 又能無限增殖的雜種細胞，并以此生產抗體。是僅由一種類型的細胞制造出來的抗體，對應于多克隆抗體、多株抗體——由多種類型的細胞制造出來的一種抗體。 單克隆抗體技術(monoclonal antibody t
關于稀釋法藥敏試驗的注意事項介紹
1.保證抗菌藥物質量 抗菌藥物應直接從廠商或相關機構獲取，實際濃度依據說明書進行換算，藥品應按照說明書要求或于-20℃下干燥冷藏，制備好的藥液應無菌并至少為-60℃冷凍保存，融化后應24小時內使用，未使用的不可再次使用。 2.培養基的要求 肉湯稀釋法中，非苛養菌可選擇陽離子調節的MH肉湯，
cems稀釋法原理
完全抽取法是先將煙氣從煙道抽取出來，然后送進分析儀器進行分析。一般采用較為成熟的分析法為紅外吸收法，可實現多組分的同時測量。根據抽取過程的不同，又可分為冷抽取法和熱抽取法，兩種抽取方法均需把樣氣進行加熱，然后經過濾器濾除煙塵。不同的是，熱抽取法是直接把高溫樣氣送入分析儀的光學腔內進行分析；冷抽取法則
藥物敏感試驗的稀釋法介紹
稀釋法藥敏試驗可用于定量測試抗菌藥物對某一細菌的體外活性，分為瓊脂稀釋法和肉湯稀釋法。實驗時，抗菌藥物的濃度通常經過倍比（lg2）稀釋，能抑制待測菌肉眼可見生長的最低藥物濃度成為最小抑菌濃度（MIC），一個特定抗菌藥物的測試濃度范圍應該包含能夠檢測細菌的解釋性折點（敏感、中介和耐藥）的濃度，同時
關于單克隆抗體的抗原準備介紹
抗原，是指能夠刺激機體產生（特異性）免疫應答，并能與免疫應答產物抗體和致敏淋巴細胞在體外結合，發生免疫效應（特異性反應）的物質。 抗原的基本特性有兩種， 一是誘導免疫應答的能力，也就是免疫原性， 二是與免疫應答的產物發生反應，也就是抗原性。 很多物質都可以成為抗原，抗原的具體分類可以參見
關于單克隆抗體藥物的展望介紹
單克隆抗體藥物在生物技術制藥中占有重要地位，并逐漸成為生物醫藥領域發展的主要方向。從全球市場來看，抗體藥物成了國際制藥業爭奪的焦點，并購成為國際制藥業巨頭快速切入抗體產業的捷徑。此外，目前市場上75%的抗體藥物將于2015年ZL到期，這也給我國生物制藥公司提供了介入抗體藥物的時機。單抗藥物治療主
關于－單克隆抗體藥物的分類介紹
單抗藥物一般分為:治療疾病（尤其是腫瘤）的單抗藥劑、抗腫瘤單抗偶聯物、治療其他疾病的單抗。單抗藥劑針對的靶點通常為細胞表面的疾病相關抗原或特定的受體。如:最早被美國FDA批準用于治療腫瘤的單抗藥物利妥昔單抗；抗腫瘤單抗偶聯物，或稱免疫偶聯物(Immunoconjugate)由單抗與有治療作用的物
關于單克隆抗體的制備過程介紹
1.免疫動物 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。 2.細胞融合 采用二
靶向克隆法
靶向克隆法是一種新的基因克隆方法，該克隆方法的特點是：在基因克隆過程中不使用已有的DNA Ligase，而是使用新開發的靶向克隆酶。靶向克隆酶能夠使末端序列相同的雙鏈DNA(14bp-18bp)同源重組，從而達到克隆基因的目的。LP Recco酶，中文名：靶向克隆酶，無需傳統基因克隆所需要的限制性內