用結晶紫染transwell細胞，發現細胞形態不清晰
有可能是因為染色之前，膜沒有風干。也有可能是配的結晶紫濃度低了！......閱讀全文
Transwell實驗
定義： 一類有通透性的杯狀裝置，可認為是一種膜濾器（Membrane filters），或者是一種通透性的支架（permeable supports）。組成： 杯子底層是一張有通透性的膜，杯子其余部分的材料與普通的孔板是一樣。這層膜帶有微孔，孔徑大小有0.1－12.0μm，根據不同需要可用不同材料，
Transwell侵襲實驗
第一節 概念這里想明確兩個概念，一個是Transwell，另一個是腫瘤細胞侵襲模型。1. Transwell關于Transwell這個詞該如何解釋，查了很多資料也未見準確的注解，我覺得可以這么理解吧，trans-這個詞根有轉移、轉運、穿過等意思，well有小室的意思，可以從字面上理解，這是一類有通透
transwell小室清洗方法
先用清水洗干凈,然后用胰酶消化1小時,最后用75%的酒精浸泡過夜,使用前,在紫外燈下面照射1小時即可。Transwell小室這項技術的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形為一個可放置在孔板里的小杯子，不同廠家對Transwe
Transwell小室的應用
（1）共培養體系：小于3.0um孔徑條件下，細胞不會遷徙通過，因此，若研究不涉及細胞運動能力，不需要細胞穿過聚碳酸酯膜，則應選擇3.0μm以下孔徑。常用0.4、3.0μm。常用的是0.4μm。將細胞A種于上室，細胞B種于下室，可以研究細胞B分泌或代謝產生的物質對細胞A的影響。（2）趨化性實驗：可用5
transwell小室清洗方法
先用清水洗干凈,然后用胰酶消化1小時,最后用75%的酒精浸泡過夜,使用前,在紫外燈下面照射1小時即可。Transwell小室這項技術的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形為一個可放置在孔板里的小杯子，不同廠家對Transwe
Transwell實驗全面總結
這里想明確兩個概念，一個是 Transwell ，另一個是腫瘤細胞侵襲 模型 。1 ． Transwelltrans- 這個詞根有轉移、轉運、穿過等意思， well 有小室的意思，可以從字面上理解，這是一類有通透性的杯狀的裝置，根據 Corning 公司的 Transwell 說明書中的介紹，可以認
Fixation－of－Cells－Cultured－in－Transwell－Dishes
Fixation of Cells Cultured in Transwell DishesTranswell culture dishes are commonly used to culture cells so that the top and bottom of the cells can
Transwell侵襲實驗總結－（4）
－Transwell的其他應用的實驗步驟1．Transwell腫瘤細胞遷移實驗過程與Transwell侵襲實驗基本一致，不同的只是不需要鋪Matrigel。個人認為，由于沒有基質膠的阻擋，細胞穿過膜的速度較侵襲實驗明顯加快，所以細胞量要更大。我做侵襲實驗的細胞密度是1×105，而遷移實驗的密度是1×
Transwell侵襲實驗總結－（1）－概念
這里想明確兩個概念，一個是Transwell，另一個是腫瘤細胞侵襲模型。1．Transwell關于Transwell這個詞該如何解釋，查了很多資料也未見準確的注解，我覺得可以這么理解吧，trans-這個詞根有轉移、轉運、穿過等意思，well有小室的意思，可以從字面上理解，這是一類有通透性的杯狀的裝置
Transwell侵襲實驗總結－（1）－概念
這里想明確兩個概念，一個是Transwell，另一個是腫瘤細胞侵襲模型。1．Transwell關于Transwell這個詞該如何解釋，查了很多資料也未見準確的注解，我覺得可以這么理解吧，trans-這個詞根有轉移、轉運、穿過等意思，well有小室的意思，可以從字面上理解，這是一類有通透性的杯狀的裝置
Transwell小室的使用方法
將Transwell小室放入培養板中，小室內稱上室，培養板內稱下室，上室內盛裝上層培養液，下室內盛裝下層培養液，上下層培養液以聚碳酸酯膜相隔。我們將細胞種在上室內，由于聚碳酸酯膜有通透性，下層培養液中的成分可以影響到上室內的細胞，從而可以研究下層培養液中的成分對細胞生長、運動等的影響。應用不同孔徑和
Transwell侵襲實驗總結－（2）－實驗用品
我的課題涉及Transwell侵襲實驗和Transwell遷移實驗，其他方面的Transwell應用我不太清楚，因此這里主要談談Transwell侵襲實驗。1．實驗用品：① Transwell小室：多種廠家可提供，論壇里常用的是Costar、Corning、BD生產的小室，我們實驗室用的是Chemi
24孔transwell加多少液體
24孔板下室一般加入600μl含20S的培養基。取細胞懸液100μl加入Transwell小室。特別注意的是，下層培養液和小室間常會有氣泡產生，一旦產生氣泡，下層培養液的趨化作用就減弱甚至消失了，在種板的時候要特別留心，一旦出現氣泡，要將小室提起，去除氣泡，再將小室放進培養板。培養細胞：常規培養12
如何用transwell進行細胞遷移實驗
Transwell法的步驟：先把小室擦干凈后在超凈工作臺照紫外過夜。如新的小室省略此步。下一步將小室倒扣并小室的底部外側滴加0.1%（還是1%記不清了）的明膠室溫放置20-30分鐘。這是將細胞消化下來，調濃度。拿出24孔板加600ml的含有刺激因子的培養基。小室上還未干的明膠甩掉，加細胞放入24孔板
transwell實驗染色后可以放多久
最好是24小時。實驗前將保存在-20℃的基質膠轉移至4℃冰箱融化過夜，使用前用無血清培養基按培養基：基質膠=2:1的比例稀釋；接種前將24孔板和Transwell小室用1×PBS浸泡5min濕潤小室。用胰蛋白酶消化細胞后，用無血清培養液洗滌細胞，用含有1%FBS的培養基重懸細胞計數。培養24h后（侵
Transwell侵襲實驗總結－（3）－操作步驟
．步驟2．1 Transwell小室制備2．1．1 無基質膠Transwell小室制備① 包被基底膜：用50mg/LMatrigel 1:8稀釋液包被Transwell小室底部膜的上室面，4℃風干。如果需要在下室面鋪FN的話，可將200ul槍頭的尖端剪掉,吸取FN均勻涂抹在小室的下面。用膠原（col
做transwell時結晶紫染色的具體
① 用棉簽擦去基質膠和上室內的細胞 ② 染色：采用0.1%結晶紫染色。 這種方法有如下優勢：(1). 不需要固定細胞，直接染色即可。(2). 配制簡單方便。(3). 染色后可以用33%醋酸脫色，將結晶紫完全洗脫下來，洗脫液可在酶標儀上570nm 測其OD值，間接
做transwell時結晶紫染色的具體詳細步驟
① 用棉簽擦去基質膠和上室內的細胞 ② 染色：采用0.1%結晶紫染色。 這種方法有如下優勢：(1). 不需要固定細胞，直接染色即可。(2). 配制簡單方便。(3). 染色后可以用33%醋酸脫色，將結晶紫完全洗脫下來，洗脫液可在酶標儀上570nm 測其OD值，間接...
Transwell細胞體外侵襲實驗的注意事項
2. 1NIH3T3 細胞制備的趨化因子與胎牛血清 趨化因子是能使細胞產生趨化運動的一類細胞因子[2 ] 。目前利用NIH3T3 細胞制備趨化因子做細胞體外侵襲實驗的實驗室比較多,時間較長且實驗步驟繁瑣。眾所周知,胎牛血清中有趨化因子,我們在不同濃度TNFα刺激下的HCCC29810 膽囊癌細胞體外
Transwell細胞體外侵襲實驗的材料與方法
1. 1Matrigel：Becton Dickinson Compary, - 20 ℃保存；Tanswell plate：Costar ,USA , # 3422 ,聚碳酯膜微孔直徑為8μm；蘇木素染液，梯度乙醇，二甲苯溶液。1. 2 趨化因子的制備 取傳代第二天長勢良好的NIH3T3細胞,無
12孔板做transwell加多少培養基
12ml。一般12孔細胞培養板每一個孔加入1ml培養基。transwell實驗原理簡單地說就是用一層膜將高營養的培養液和低營養的培養液隔開，細胞放在低營養的培養液里，為了找吃的，細胞會往高營養的培養液里面跑，但是有膜擋著，所以要穿過膜才行。我們在膜上涂上一層基質膠，模仿細胞外基質，于是細胞要把基質消
Transwell細胞體外侵襲實驗的注意事項
2. 1NIH3T3 細胞制備的趨化因子與胎牛血清 趨化因子是能使細胞產生趨化運動的一類細胞因子[2 ] 。目前利用NIH3T3 細胞制備趨化因子做細胞體外侵襲實驗的實驗室比較多,時間較長且實驗步驟繁瑣。眾所周知,胎牛血清中有趨化因子,我們在不同濃度TNFα刺激下的HCCC29810 膽囊癌細胞體外
用結晶紫染transwell細胞，發現細胞形態不清晰
有可能是因為染色之前，膜沒有風干。也有可能是配的結晶紫濃度低了！
transwell共培養上下室加的培養基一致嗎
需要根據實驗不一致，需要有遷移誘因的，上下室就不一樣。只是考察簡單運動的，可以一致。推薦多看文獻，里面會有描述。
Matrigel－invasion－assays
OverviewMatirgel is considered as basement membrane and generated from EHS sarcoma. Matrigel contains not only basement membrane components (collagens
腫瘤細胞侵襲試驗原理和實驗步驟2
（3）NE+IFN-DMEM（-6M，50ng）NE---A液（1μg/μl，1mg/ml） 20.5μlIFN-γ（25ng/μl） 25 μlDMEM UP TO 100 ml過濾消毒，4℃保存（4）低血清DMEM培養基（上室）（5）20%FBS-DMEM培養基（下室）2、準備（1）溶膠，4℃過
腫瘤細胞侵襲試驗（Tumour－Invasion－Assay）
一 、 原理Matrigel 是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質成分，含有LN、IV型膠原、接觸蛋白和肝素硫酸多糖，鋪在無聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯濾膜上，能在DMEM培養基中重建形成膜結構，這種膜結構與天然基質膜結構極為相似。濾膜孔徑一般為8um，而且膜孔都被Matrigel覆蓋，細胞不能自由穿過，必須
顯微鏡技術——電子顯微技術
The Transmission Electron Microscope (TEM)?(HEI)An explanation of how the TEM works.??TEM Specimen Preparation?(HEI)??Serial Sectioning?(Walter Steffe
Measurement－of－primary－endothelial－cell－permeability－to－fluxes－of－dextran..
Measurement of primary endothelial cell permeability to fluxes of dextran or albuminThe fluxes of albumin or dextran across vascular endothelial cell
細胞侵襲實驗總結！
實驗原理將細胞小室（Transwell小室）放入培養板中，小室內稱上室，培養板內稱下室，上室內盛裝上層培養液，下室內盛裝下層培養液，上下層培養液以聚碳酸酯膜相隔。我們將細胞種在上室內，由于聚碳酸酯膜有通透性，下層培養液中的成分可以影響到上室內的細胞，從而可以研究下層培養液中的成分對細胞生長、運動等的