目前肌酐檢測方法主要有兩種,苦味酸法和酶法,簡單介紹如下

1. 堿性苦味酸法(Jaffe反應)
1.1 測定原理
肌酐有酮、烯醇式兩種,在堿性介質中均以烯醇式肌酐形式存在,再與堿性苦味酸反應,產生一種紅色的苦味酸肌酐復合 物,所形成的紅色與肌酐濃度成正比,并可在波長500~ 520nm處測定。
1.2 影響因素
a、假肌酐
此法的主要缺點是特異性不高,血中的維生素C、丙酮酸、丙酮、葡萄糖、乙酰乙酸、果糖、蛋白質、氨基馬尿酸 及很多其他化合物亦能與堿性苦味酸生成紅色,這些不是肌酐而能起紅色反應的物質統稱為假肌酐。
對于這些假肌酐的干擾,應用2點速率法來測定,即讀取起始吸光度(A i),再過120S讀取終末吸光度 (Af),計算時用Af—Ai=ZXA,通過2點速率法,有效地降低這些假肌酐帶來的結果偏高的影響,假肌酐濃度過高時,還是會產生影響。
b、高濃度膽紅素
高膽紅素對測定結果也有很大影響,往往使結果偏低,尤其新生兒血清中的高膽紅素,常會出現結果負值。這是因為膽紅素在波長510nm處也有較強光吸收,影響Jaffe反應生成的紅色復合物。
對于因高膽紅素帶來的負影響,一 般的苦味酸試劑中都加入了各種氧化物(包括過氧化物酶、 膽紅素、氧化酶、高鐵氰化鉀等),使膽紅素被氧化成膽綠 素,來降低其干擾。
c 、溶血
在紅細胞、血清或血漿及尿液中假肌酐物質各約為60%、20%及50%,相當于大量的假肌酐存在于紅細胞中,為避免結果的誤差,血清樣品應注意不能發生溶血。
2. 酶法
2.1 測定原理
肌酐在肌酐酶的催化下水解生成的肌酸,在肌酸酶的催化下肌酸水解產生肌氨酸和尿素。然而,肌氨酸在肌氨酸氧化酶的催化下氧化生成甘氨酸、甲醛和雙氧水;最后偶聯Trinder反應,比色測定肌酐在肌酐酶的催化下水解生成的肌酸,在肌酸酶的催化下肌酸水解產生肌氨酸和尿素。然而,肌氨酸在肌氨酸氧化酶的催化下氧化生成甘氨酸、甲醛和雙氧水;最后偶聯Trinder反應,比色測定。
2.1 影響因素
a、內源性肌酸
目前均通過在R1試劑中除去。
b、膽紅素
通過在試劑中加入亞鐵氰化鉀除去膽紅素干擾,但是濃度過高還是會有影響。
c、抗壞血酸
抗壞血酸主要影響Trinder反應(后期推送一期匯總Trinder反應的項目),目前通過在體系中加入抗壞血酸氧化酶消除抗壞血酸的干擾。同樣高濃度抗壞血酸依然會影響酶法測定,尤其肌酐濃度較低時更加明顯。
d、藥物
酶法易受藥物影響,如強苯磺酸鈣、酚磺乙胺等,如果肌酐酶法測定結果明顯與臨床不符合時,可考慮患者用藥情況,進一步查找原因。
兩種方法對比
苦味酸法價格便宜,但是容易受到假肌酐影響,且該試劑可能容易污染管路;酶法雖然價格偏貴,但是線性范圍寬,抗干擾能力強,不易受到假肌酐和內源性肌酸影響,是目前主流方法,但是易受藥物干擾,改問題還需引起重視。
參考文獻
屈引婷,王鴻. 兩種不同方法檢測血清肌酐結果的比較. 現代檢驗醫學雜志,
賴澤仁, 血清肌酐的酶法測定. 中國衛生檢驗雜志
余新華 ,淺析影響肌酐測定因素
鄢斌 ,消除膽紅素對肌酐測定的干擾[期刊論文]-實用醫技雜志