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  • 發布時間:2021-03-08 22:22 原文鏈接: mosquito在解析新冠病毒復合物結構的應用

           2020年2月18日,清華大學生命學院王新泉課題組和醫學院張林琦課題組緊密合作,利用X射線衍射技術,解析了新型冠狀病毒(2019-nCoV)表面刺突糖蛋白受體結合區(receptor-binding domain, RBD)與人受體ACE2蛋白復合物的晶體結構,準確定位出新冠病毒RBD和受體ACE2的相互作用位點,闡明了新冠病毒刺突糖蛋白介導細胞侵染的結構基礎及分子機制,從而為治療性抗體藥物開發以及疫苗的設計奠定了堅實的基礎。(2019-nCoV RBD-ACE2復合物晶體結構

         
     幾乎在同時,西湖大學周強團隊成功利用冷凍電鏡技術解析出此次新冠病毒的受體-ACE2的全長結構。這是世界上首次解析出ACE2全長結構,和清華大學的研究結果相互補充和支持。(ACE2-B0 AT1復合物結構圖
     


     

    X射線晶體衍射技術:老而彌堅,風采依舊

    在冷凍電鏡技術問世之前,一直以來研究大分子精細三維結構的主要方法是X射線晶體衍射技術,目前蛋白質數據庫中已測定的近14萬個結構中約90%是通過此方法獲得的。由此可見,X射線晶體學在蛋白質結構解析中的重要地位。

     

    傳統的X射線晶體學方法首先需要獲得生物大分子晶體,在合適的條件下生長出一定尺寸和較好質量的晶體。早期利用實驗室X光源進行生物大分子晶體結構測定,通常需要百微米尺度的晶體才能獲得較高的分辨率。高亮度同步輻射光源及其相關光束線站技術的發展,使生物大分子晶體結構測定的效率不斷提高,對生物大分子晶體本身的要求不斷降低,10μm甚至幾微米尺寸的晶體都可能獲得高分辨的結構解析。


    X射線晶體衍射的關鍵:成功的晶體生長


    上圖為為幾種典型的蛋白晶體實驗結構
     

    mosquito, 來自英國SPT:蛋白結晶領域的明星產品


    mosquito擁有以下幾個獨特的優勢:
     

    1. 低至25 nL的量程,極大節省了珍貴的蛋白
     


    2. 采用獨特的固相置換原理:
     

    •  沒有Air-gap和液體氣泡;  

    •  無需調整和定義移液參數;

    • 不受液體粘稠度影響(PEG20000; 100%甘油;乙醇,去垢劑,膜蛋白和MPD等) 



    固相置換針頭,無視液體粘度、無氣泡和空氣柱


    3. 速度快,2分鐘完成Swissci板的點樣

     


     

    4. 應用范圍廣泛,勝任坐滴、懸滴、油滴、添加劑、微晶、Bicelle等多種應用。
     

    坐滴法 (sitting drop)

     

    懸滴法 (hanging drop)

     

    油滴法 (microbatch)

     

     添加劑法 (additive screening)


    20 世紀后半葉發展最迅速的學科之一便是結構生物學,這是一門通過蛋白質結構來詮釋蛋白質功能的學科。蛋白質是生命活動主要的執行者,只有形成了正確的結構,蛋白質才能具有正確的功能。面對新冠疫情,在原子分辨率水平極其清晰地了解新冠病毒與受體復合物作用界面的信息,對于了解新冠病毒進入細胞或者感染細胞的機制,以及新冠疫苗和治療性抗體藥研發具有重要的指導意義。

     

    上海騰泉生物自2007年進入中國以來,一直致力于蓬勃發展的中國生命科學和醫藥研發事業,尤其在蛋白結構領域,其核心產品mosquito,dragonfly多年來一直是科學家身邊值得信賴的伙伴。2017年,騰泉引入美國品牌Jansi,以此提供優秀的蛋白結晶紫外熒光成像設備,助力科學家們更快更有效率地找到合格的蛋白晶體。2019年,騰泉母公司SPT Labtech 不斷創新,關注冷凍電鏡中的核心難點,樣本制備,新產品變色龍以獨有的blot free和全自動,以期幫助科學家更好地制備高質量的Cryo-EM樣品。
     


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