凝聚胺法交叉配血標準操作規程

　　1. 原理

　　凝聚胺（polymatching）法首先利用低離子介質降低溶液的離子強度，減少紅細胞周圍的陽離子云，促進血清（漿）中的抗體與紅細胞相應抗原結合，再加入帶亞電荷的高價陽離子多聚物-凝聚胺溶液，中和紅細胞表面的負電荷，縮短細胞間距，形成可逆的非特異性聚集，并使IgG型抗體直接凝集紅細胞。加入中和液后，僅由凝聚胺引起的非特異性聚集，會因電荷中和而分散，而由抗體介導的特異性凝集則不會分散。

　　2. 標本采集：

　　2.1 標本種類：抽取靜脈血3-4ml待凝固后分離血清，將細胞配成5％鹽水懸液將供血者血樣以同樣方法分離血清(漿)和紅細胞懸液。

　　2.2 標本要求：抗凝和干燥管均可，如用抗凝血主張用EDTAK2（mg/dz）抗凝標本應無溶血，切標簽齊全。

　　3. 標本儲存：急診標本30分鐘內完成操作，標本應至4℃冰箱保存7天。

　　4. 標本運輸：室溫運輸。

　　5. 標本拒收標準：細菌污染。溶血標本，標簽不齊全不能作測定。

　　6. 試劑：

　　6.1 試劑名稱：凝聚胺試劑(polymatching)

　　6.2 試劑生產廠家：(臺資)珠海貝索生物技術有限公司。

　　6.3 試劑組成：

　　試劑1. 低離子介質(LowLonic Medium，LIM).試劑打開使用后，可置室溫貯存，未開封者2-10度貯存，有效期為2年。

　　試劑2. 凝聚胺溶液(PolybreneSolution).貯存及有效期同上。

　　試劑3. 重懸液(ResuspendingSolution).貯存及有效期同上。

　　試劑4. 8.5％生理鹽水。

　　7. 儀器：

　　7.1 血型血清索離心機：XTL-4.7 上海離心機械研究所

　　7.2 離心機：上海手術器械廠

　　7.3 電熱恒溫水箱：北京長源實驗設備廠

　　7.4 顯微鏡：OLYMPUS(日本)

　　8. 操作步驟及結果判斷：

　　8.1 供受者紅細胞用生理鹽水配成3-5％的細胞懸液。加樣量均為：血清2滴，紅細胞懸液1滴。主管：受血者血清+供者紅細胞懸液；次管：受者紅細胞懸液+供者血清；(陰陽對照管另設)。

　　8.2 各管分別加低離子介質0.6ml混勻置室溫1分鐘。加凝聚胺溶液2滴，混勻，置室溫15秒。

　　8.3 1000g(3000rpm)，離心18秒，棄上清液，管底保留約2滴液體。輕搖

　　試管，觀察是否形成凝塊。如未形成凝塊，則重做前面試驗。

　　8.4 加入2滴重懸液，輕輕混合，肉眼或顯微鏡下觀察結果。

　　8.5 凝塊在1分鐘內分散，試驗結果為陰性，供受者血液配合；反之，如依照為不同強度的凝塊，試驗結果判為陽性，供受者血液不配合。實驗結果必須在3分鐘內判讀。

　　9. 操作性能： 快速簡便，特異性強，靈敏度較高，重復性好。

　　10. 超出范圍結果處理：

　　10.1 細胞自凝： 在冬天氣溫較低時，某些病人血清中含有冷凝集素而導致交叉配血假陽性；遇此現象可用37℃-40℃生理鹽水洗滌紅細胞并置37℃水溶中輕輕搖動，觀察結果。

　　10.2 若病人血清(血漿)含有肝素，如洗腎患者能影響配血，須多加4-6滴polybrene溶液以中和肝素。

　　10.3 紅細胞懸液為5％為宜，過濃或過淡可使抗原抗體比例不適當，反應不明顯易誤判。

　　10.4 各種原因引起的紅細胞溶解，誤判為不凝集，部分溶血時，可溶性血型物質中和了相應的抗體。

　　11. 方法局限性：

　　11.1 試管，滴管吸頭和玻片必須清潔干燥，防止溶血。

　　11.2 操作方法應按規定，先加血清，然后再加紅細胞懸液，以便容易核實是否漏加血清。

　　11.3 離心時間不宜過長或過短，速度不宜過快或過慢，以防假陽性或假陰性結果。

　　11.4 觀察時應注意紅細胞呈特異性凝集，繼發性凝固及線狀排列的區別。