摘 要：目的：確定高速逆流色譜分離制備高純度豐城雞血藤黃酮類物質刺芒柄花素的條件。方法：利用高效液相色譜測定刺芒柄花素在兩相溶劑體系中的分配系數K 值，通過K 值優化確定高速逆流色譜分離的兩相溶劑體系，并測定刺芒柄花素的純度。結果：用于高速逆流色譜分離的兩相溶劑體系為：正己烷- 乙酸乙酯- 甲醇- 水(4 :5 :4 :5 ，V/V) ，體系的上相為固定相，下相為流動相。高速逆流色譜分離條件為：流速2mL/min ，轉速800r/min，檢測波長260nm，溫度26℃。從雞血藤乙醚提取物中可一步純化得到活性成分刺芒柄花素，得率為16.1%，高效液相色譜檢測其純度達96.3%。結論：該溶劑體系分離結果可靠，可作為高效快速分離純化刺芒柄花素的制備分離方法。
關鍵詞：豐城雞血藤；高速逆流色譜；刺芒柄花素；高效液相色譜
豐城雞血藤(Millettia nitita var．hirsutissima)為豆科類植物，別名過山龍、毛豆結藤、豬婆藤、香花崖豆藤、弟氏崖豆藤、下巴豆，為江西中藥特產。其根入藥，性味微甘、苦、溫，能行氣活血，用于治療月經不調、血虛萎黃、麻木癱瘓、風濕疼痛等癥。黃酮類化合物為其主要生物活性物質，且多為異黃酮，具有較高藥用價值[1-2]。天然植物中的黃酮類化合物的分離和分析方法很多，有梯度pH 值萃取法、鉛鹽沉淀法、柱色譜法、薄層色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法、超臨界流動萃取等。現代儀器分離法能快速對復雜成分進行精分離，得到高純度物質。作為先進的現代儀器分離方法，高速逆流色譜( h i g h - s p e e dcounter-current chromatography，HSCCC)用于分離天然
植物中的活性成分越來越受到重視。
HSCCC 是20 世紀80 年代期發展起來的一種液液分配色譜分離技術。由于不使用固態支持介質，避免了因不可逆吸附引起的樣品損失、失活變性等現象，具有樣品無損失、無污染、高效、快速和大制備量分離等優點，高速逆流色譜法已廣泛應用于天然產物化學成分的分離[3-4]。流體動力學中有一種特殊的動力學平衡現象，即單向流體動力學平衡現象，在這樣的動力平衡體系中，兩種互不混溶的溶劑相在轉動螺旋管中單向地分布。HSCCC 就是利用這種現象，讓色譜儀中的螺旋管做行星運動，由于重力及螺旋管力的作用，固定相移向螺旋管的入端，使得固定相得以保留，同時兩相溶劑在螺旋管中得以混合。由于各溶質在兩種互不相溶的溶劑系統中分配系數不同，從而得以分離[ 5- 8]。
目前，采用HSCCC 法分離豐城雞血藤提取物中生物活性物質的研究還未見報道。本研究旨在選擇分離豐城雞血藤黃酮類物質最佳的HSCCC 溶劑體系和操作條件，利用高效液相色譜( h i g h p e r f o rma n c e l i q u i dchromatography，HPLC)來測定兩相溶劑體系中各組分的分配系數K 值，運用高速逆流色譜技術分離純化豐城雞血藤中刺芒柄花素。