制備液相色譜技術與操作

在化學化工醫藥等廣泛采用的層析法是最為典型的制備色譜。下面對制備色譜中的一些常用概念做一下介紹。 

（1）分析色譜的目的，是分析出混合物中一個（或者幾個）純物質的含量。制備色譜的目的，是從混合物中得到純物質。為了加快分離的時間與提高分離的效率，制備色譜的的進樣品量很大，導致制備色譜柱子的分離負荷的相應加大，也就必須加大色譜柱填料，增大制備色譜的直徑和長度，使用的相對多的流動相。 

（2）樣品的前處理： 

（3）制備色譜柱的材質及其特點 

（4）固定相的選擇： 

（5）裝柱方法的選擇 根據固定相顆粒度和柱子的尺寸，采用不同的裝柱方法，往往裝填越好分離效果越好。裝柱效果跟填料的顆粒度關系很大，顆粒度的減少會導致裝柱的難度。一般來說，顆粒直徑小于20－30um的固定相采用濕法裝填。所謂“敲擊－裝填”技術適用于顆粒直徑大于25um的固定相。濕法的目的是迫使相對稀松的 固定相懸漿以高速裝入色譜柱子，從而減少空隙的形成。然而，當柱直徑大于20mm，所加壓力為30－40bar時，高壓懸漿裝填技術就變得十分復雜。為將小顆粒固定相裝入更大得制備型色譜柱，可采用柱長壓縮技術。這種方法，先將固定相懸漿（或偶爾是干填充物）裝入柱中加壓，利用物理方法將其壓緊。壓緊的方法有兩種：徑向壓縮和軸向壓縮。 濕法裝柱需要一定的設備，在柱子填完后，應用有柱效的測量，對柱效低的柱子應該重填。 

（6）流動相的選擇： 

（7）加樣的方法： 可以采用以下方法之一進樣。－用注射器進樣－用旋轉閥進樣－通過六通閥進樣－通過主泵進樣－通過輔泵進樣－固體上樣 

（8） 泵的選用：根據有無脈沖、能承受的最大壓力、控制的精度、售后服務等來選擇泵。 

（9）檢測器的選用： 一般的分析池的最大允許流速僅為5 mL/min 或者10mL/min。而專門的制備池的最大允許流速可為150mL/min。有時，采用旁路分離管，將少量流體導入分析池進行檢測，是一個不錯的辦法，但其濃度的誤差會相對較大。 

（10）組分保留時間的估計 用分析柱子在同等色譜條件下（同樣的固定相和流動相）測定保留時間后，按照單一組分的線流速（不是體積流速）一定，通過計算可以知道組分的大致保留時間區域。 分析譜圖的峰形狀，對確定保留時間也有很大的參考價值。