荔枝核是無患子科植物荔枝的干燥成熟種子，主要分布在福建、臺灣、廣西、廣東等省。我國古代藥典記載荔枝核性溫，歸肝、腎經, 能祛寒止痛。現代臨床實驗研究顯示荔枝核能夠降低血糖、調節血脂和提高抗氧化能力、抑制乙肝病毒的作用［1，2］。徐慶等［3］發現荔枝核中黃酮類化合物具有很好的抑制乙肝病毒表面抗原HBsAg的功效。目前除了少量荔枝核被藥用外，大量荔枝核都被遺棄浪費。為了充分利用該資源、變廢為寶、研究如何開發荔枝核抗乙肝成分黃酮類化合物很有意義和價值。天然藥用植物中黃酮類化合物測定方法主要有紫外可見分光光度法［4］、高效液相色譜法［5］、薄層色譜法［6］等。國內外文獻關于荔枝核中黃酮類化合物的測定方法尚未見報道，本文建立了鋁鹽顯色分光光度法測定荔枝核抗乙肝成分黃酮類化合物的方法，并測定荔枝核抗乙肝成分黃酮類化合物的含量。
1 儀器與材料
1.1 儀器756MC紫外-可見光分光光度計（上海分析儀器總廠）；WS2-133-74多功能電子恒溫水浴鍋（廣東汕頭醫療器械二廠），Explorer－11140電子天平（瑞士OHAUS公司）。
1.2 材料荔枝核購自中藥材公司，產地廣西；蘆丁對照品來自中國藥品生物制品檢定所；氯化鋁、亞硝酸鈉、氫氧化鈉（分析純）；95%乙醇；石油醚；水為蒸餾水。
2 方法與結果
2.1 測定方法依據以蘆丁為對照品測定荔枝核抗乙肝成分黃酮類化合物的含量，加入鋁離子試劑，同時控制適宜pH值，使黃酮類化合物與鋁鹽形成配合物在可見光區能獲得穩定的特征吸收峰。
2.2 試樣品溶液的配制荔枝核打成粉過40目的篩。取一定量的荔枝核粉，加入適量50％ 乙醇浸提。提取液過濾后加入石油醚萃取以除去酯類物質和色素，分液去掉石油醚層得到荔枝核黃酮類化合物的提取溶液。
2.3 對照品溶液的配制精確稱取蘆丁標準品10.00 mg, 用50%乙醇溶解后定容50.00ml，配制成蘆丁50%乙醇標準溶液（0.200 mg/ml）。
2.4 檢測波長的選擇各取試樣品溶液和蘆丁對照品標準溶液少量，按2．5方法顯色后在400~650 nm區間掃描，確定二者在510 nm處均有一強吸收峰(圖1~2)，故選擇510 nm 為測定波長。
圖1 蘆丁標樣顯色掃描曲線(略)
2.5 標準曲線的建立精確量取蘆丁對照溶液 0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，6.00 ml于25 ml 容量瓶，加水至6 ml。加入5% NaNO2溶液1.00 ml, 混勻后放置6 min；再加入10% AlCl3溶液1.00 ml，混勻后放置6 min；最后加入4% NaOH溶液10.00 ml顯色，加水至刻度。靜置15 mins后在510 nm處測定吸光度，以1號瓶為空白。繪制出吸光度-濃度標準曲線（圖3）。用最小二乘法求出回歸方程為：C（μg/ml） = 2.541 61 83.286 26A, 相關系數r = 0.999 8 ,P＜ 0.0001表明蘆丁含量在線性范圍8.00~48.00 μｇ/ml之間與吸光度呈良好的線性關系。
圖2 荔枝核提取液顯色掃描曲線(略)
圖3 蘆丁標準曲線(略)
2.6 準確性實驗取荔枝核黃酮類化合物的提取液，加50％ 乙醇配成不同濃度的3種樣品。取1ml樣品溶液，按2．5顯色測定A。結果見表1。實驗顯示5次測定A值變化很小，相對標準偏差（RSD）＜1.5% (n=5)，表明該方法準確性高。
表1 準確性實驗結果(略)
2.7 穩定性實驗取1ml的 1號樣品顯色后,每隔10 min測定1次A值。結果見表2。實驗表明在30 min內A值保持穩定，1 h后A值下降約10%, 因此提取液顯色后應在30 min內測定吸光度。
表2 穩定性實驗結果(略)
2.8 加標回收實驗取3號樣品1 ml于25 ml，再加入蘆丁標準溶液1.00, 2.00, 3.00, 4.00 ml，按2.5法顯色測定總黃酮含量，計算加標回收率。結果見表3。
表3 加標回收實驗結果(略) 從表3可見, 總黃酮含量在線形范圍(8.00~48.00 μg/ml)內，回收率在99.38% ~103.15%之間,平均回收率達到100.82%(RSD=1.59%)，表明該方法可以作為荔枝核中抗乙肝成分黃酮類化合物含量的測定方法。
2.9 荔枝核抗乙肝成分黃酮類化合物含量的測定荔枝核打成粉過40目的篩。平行取5 g荔枝核粉5份，加入50%的乙醇溶液100 ml，80℃回流提取兩次，第1次6 h，第2次4 h。合并兩次提取液，提取液加入石油醚萃取除去酯類物質。取一定體積的萃過液，稀釋至一定倍數。吸取稀釋液1 ml按上面的方法顯色，測定吸光度，通過回歸方程計算出稀釋液中總黃酮的濃度。荔枝核中總黃酮含量按下式計算：含量(%)=總黃酮的濃度×25×提取液的體積數×稀釋倍數 荔枝核原料的質量×100% 表4是5次平行實驗的結果。從表中可以看到荔枝核中抗乙肝成分黃酮類化合物的平均含量為7.13%，RSD=2.39%（n=5）。
表4 荔枝核黃酮類化合物含量(略)
3 討論
3.1 采用紫外分光光度法測定荔枝核抗乙肝成分黃酮類化合物的含量具有快速、準確、重現性好的特點。
3.2 提取液顯色前用石油醚萃取掉脂類物質和色素，減少了干擾，使含量測定結果準確性更高，重現性更好。
3.3 荔枝核抗乙肝成分黃酮類化合物的含量測定顯示黃酮類化合物的含量較高，可以作為新的抗乙肝藥物成分來源開發利用。