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  • 發布時間:2019-03-25 22:51 原文鏈接: 結合磁珠實驗

    這一步僅為基因表達的系列分析 cDNA 合成中實驗方案 A 的一部分,在實驗方案 B 中,cDNA 已經結合到鏈霉抗生物素包被的 PCR 試管上,因此不必用磁珠結合。


    實驗材料

    磁珠

    試劑、試劑盒

    Dynabead M-280鏈霉抗生物素

    儀器、耗材

    磁設備

    實驗步驟

    實驗方案 A

    1. 振蕩 lmin 以使 Dynabead M-280 鏈霉抗生物素重新成為混懸液。

    2. 將 2X 的 100 ul Dynabeads 轉移至 U—個 1.5 ml 的 Eppendorf 試管中。

    3. 用磁設備固定磁珠,移去上清液。

    4. 用 200 ul 的 IX 結合及沖洗緩沖液重懸磁珠沖洗 3 次,固定磁珠,移去沖洗液。

    5. 將 NlaIII 酶消化后的 cDNA 分成兩份各 10ul,每份中加入 90ul 的重蒸水和 100ul 的 2X 結合及沖洗緩沖液;混合后加入一份沖洗過的磁珠。

    6. 混合后,在室溫下 W 育 30 min(每 IOmin 混合 1 次)。

    7. 用磁設備固定磁珠,棄去上清液。

    8. 用 200ul 的 IX 結合及沖洗緩沖液沖洗固定的磁珠 3 次,然后再用 200ul 的 LoTE 沖洗 1 次。

    9. 在沖洗完最后 1 次后,固定磁珠并移去 LoTE。

    10. 繼續進行第 5 步


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