Southern印跡實驗——電轉印法

因為聚丙烯酰胺凝膠的扎徑太小，DNA不能在其橫截面上有效地擴散，毛細管轉移法不適用DNA從聚丙烯酰胺凝膠的轉移。因此，聚丙烯酰胺凝晈必須在低離子強度的緩沖液中用電轉移法進行印跡。

DNA

TBE

Scotch-Brite墊Whatman濾紙

1.  在非變性或變性聚丙烯酰胺凝膠中電泳DNA樣品。

2.  電泳將近結束時，將一張大小足以覆蓋凝膠中相應部分的尼龍膜漂浮于蒸餾水表面，然后浸入水中泡5 min。

3.  從電泳裝置中取去一塊玻璃板，染色后對凝膠進行照相（如果是非變性膠）在凝膠的表面鋪一張Whatman 3 MM 濾紙，排去其間的所有氣泡。

4.  揭起濾紙將凝膠剝離玻璃板。
 

5.  將2塊Scotch-Brite墊浸泡于0.5XTBE電泳緩沖液中，反復擠壓和振動除去氣泡。

6.  裁7張與凝膠大小相等的Whatman 3 MM 濾紙，浸于0. 5×TBE電泳緩沖液中15~30 min。

7.  將一塊飽和過的Scotch-Brite墊置于凝膠容器中灰色嵌板的內表面，將3張浸濕的濾紙置于其上，一次放一張，排去其間的氣泡。

8.  將貼著凝膠的濾紙用0.5×TBE浸沒，置于上述濾紙層之上4將凝膠的表面用0.5xTBE浸沒，將預先浸濕的膜置于凝膠之上。

9.  用0.5xTBE浸沒膜的表面，將剩余旳4張飽和過的Whatman 3 MM 濾紙置于其上。

10.  再加上另一塊飽和過的Scotch-Brite墊，關上凝膠容器。

11.  用0.5xTBE半充滿下Tras-Blot電轉印室，將凝膠容器置于其中，使灰色嵌板面向陽極。

12.  加入0.5xTBE充滿轉印室，打開冷卻裝置，在30 V 下進行電轉印。

13.  取下膜，用鉛筆作好標記或切去一角標示膜的方向。

14.  從非變性凝膠轉印的膜要進行變性，DNA面朝上，凝膠在3張用0.4 mol/l NaOH 浸泡過的Whatman 3 MM 濾紙之上放置10min。

15.  用2xSSC漂洗膜，置于一張Whatman 3 MM 濾紙上晾干，固定其DNA。將膜保存于室溫。