poly（A）+RNA的制備實驗

RNA

NaOH寡聚脫氧胸苷纖維素poly（A）樣品緩沖液LiClEDTATE乙酸鈉

離心機分光光度計搖床

1.  先用10 ml 5 mol/l NaOH清洗硅化的層析柱，然后用水沖洗。

2.  取0.5 g oligo（dT）纖維素干粉加1 ml 0.1 mol/l NaOH中，倒入柱內，以約10 ml 水沖洗。

3.  用10~20 ml 加樣緩沖液平衡柱子，至流出液pH約7.5。

4  于70℃加熱含2 mg 總RNA的水溶液10 min，再用10 mol/l LiCl調節溶液中LiCl至終濃度0.5 mol/l。

5.  加RNA溶液至oligo（dT）柱，并以1 ml poly（A）加樣緩沖液洗滌，將流出液重新上柱2次以上。

6.  用2 ml 中度洗脫緩沖液洗柱子，用盛有2 ml 2 mmol/l DETA/0.1%SDS的試管收集洗脫的RNA溶液。

7.  按步驟2重新平衡柱子，重復步驟2~4的poly（A）選擇吸附和冼脫過程。

8.  調整收集的RNA溶液的乙酸鈉濃度至0.3 mol/l，加2.5倍體積乙醇，移至2個硅化的離心管中，-20℃放置過夜或干冰/乙醇中30 min。

9.  于4℃ 304 000 g 離心如沉淀RNA。棄去乙醇，晾干沉淀，重溶于150 ul 無RNA酶的TE緩沖液，合并樣品。

10.  取5 ul 在70℃加熱5 min 后，在1%瓊脂糖凝膠電泳中檢查RNA的質量。

來源于《cDNA微陣列技術中內標 Poly (A )+ RNA 的制備》