過氧化氫酶的測定實驗

H₂Ｏ₂：H₂Ｏ₂ 氧化還原酶。

H₂Ｏ₂ →Ｏ₂ + H₂Ｏ

這個綠色的酶有四個相同的亞基組成（Mr＝60 000）， 每一個亞基攜帶一個正鐵血紅素 IX 基團，這個基團處于高速旋轉狀態，核心是一個三價的鐵。鐵離子的四個配位位點被卟啉結構占據，第五個位點被蛋白質的組氨酸得到。第六個位點保持自由狀態，但也有可能被氰化物或者氟化物這樣的陰離子占據，并阻礙酶反應。氰化物結合后會減少鐵移入卟啉環平面，高速旋轉狀態變為低速旋轉狀態，同時伴隨著一種很大的光譜移動（回顧請查閱 Nicholls 和 Schonbaum，1963）。過氧化氫酶是被 Sumner（1937） 最早結晶的酶之一，并且由于它髙度的結晶傾向性，晶體懸浮液是首選的儲存形式。酶底物的過氧化氫會在高濃度的時候破壞酶。因此，酶實驗不能發生在底物飽和的環境下，而且 Km 也不能直接被動力學分析確定。在 405 nm 處酶的吸收系數為 38×10³ l/（mmol·mm）[9.5 l/（mmol·mm）每血紅素基團]。

酶樣品

H2Ｏ2磷酸鉀

分光光度計

實驗所需「試劑」具體見「其他」

0.98 ml H₂Ｏ₂ 溶液

0.02 ml 酶樣品（濃縮的原料用 0.05 mol/L 磷酸鉀溶液 pH 7.0 稀釋大約 2000 倍）

25℃ 在比色皿中測量的吸收值于 240 nm 處降低；ε₂₄₀＝4.0 l/（mmol·mm）。每分鐘吸收值變化 0.04 相當于每分鐘分解 1 umol H₂Ｏ₂，約 1 IU，約 16.67 nkat。

試劑：

0.05 mol/L 磷酸鉀，pH 7.0

H₂Ｏ₂ 溶液（約 10 mmol/L）：0.06 ml 30％ H₂Ｏ₂ 稀釋于 50 ml 0.05 mol/L 磷酸鉀 pH 7.0 中，在 240 nm 處以緩沖液為對照的吸收值應該是 0.50±0.01.否則要用緩沖液或者 H₂Ｏ₂ 調節這個值。