植物組織中酶的組織化學鑒定,其基本原理是以某些物質為基屈,在專一酶的作用下,產生 種有顏色的化合物來表示某種酶的存在。為保持酶的活性,通常要采用冰凍切片法來得到切片,有時也可用徒手切片法。
(1)細胞色素氧化酶:將切片放人磷酸緩沖液 (pH 值 5.8) 中,室溫下放置 5-10min, 然后移入巳配備好的 1%α-萘酚和 1%鹽酸對氨基二甲胺的等量混合液中,約 5min 后取出,放在載玻片上,加 1滴重蒸餾水,蓋上蓋玻片后鏡檢.顯示藍色的部位即有細胞色素氧化酶存在。
(2) 過氧化物酶:將切片先在磷酸緩沖液 (pH 值 7.2) 中浸泡 5min 后,放入 0.1%鉬酸銨溶液中于溫下浸泡 5 min, 再移入 0.1%聯苯胺溶液(聯苯胺 0.1g, 蒸餾水 100ml, 加熱溶解,冷卻后加入 30%的過氧化氫1滴。)中 0.5-1.0 min, 取出放在載玻片上,加蒸餾水 1滴,蓋上蓋玻片后鏡檢,顯示藍色部位即有過氧化物酶存在,
(3) 多酚氧化酶:切片先在磷酸緩沖液 (pH 值 7.2) 中放置 5min, 移至 1%鄰苯二酚溶液中,在 37'C下保溫 3-10 h 后鏡檢。顯荼褐色部位,表示有多酚氧化酶存在。
(4) 腺苷三磷酸酶:將切片在底物(配方: 0.125%ATP 10mL,0.2mol/L 、 pH 值 7.2TrisHCl 緩沖液 10 mL,2%硝酸鉛 1.5mL,0.1mol/L 硫酸鎂 25mL, 蒸餾水 1mL) 中 37℃下保溫1-3h, 蒸餾水漂洗,在 1%硫化胺中顯色 1min, 用蒸餾水洗后裝片,鏡檢,呈深棕色或棕黑色處即有腺昔三磷酸酶存在。
(5)脫氫酶:將切片浸在 0.5%TTC 溶液中, 37℃下放置 15min 左右后取出,裝片,鏡檢,有紅色反應的部位即有脫氫酶存在。
(6)淀粉酶:先將含 1%淀粉的 1%瓊脂膠液趁熱涂在載玻片上,冷凝后把植物組織的切片貼在瓊脂凝膠上在 30-50℃溫室中放置 2h, 再將載玻片放在碘-碘化鉀溶液 (0.12%)中染色,貼切片處如不被染成藍色,則表示組織中有淀粉酶存在。 展 |