磷鎢酸還原法檢測血清尿酸（UA）實驗

一、實驗試劑：

1. 磷鎢酸貯存液：稱取鎢酸鈉50g，溶于約400ml蒸餾水，加濃磷酸40ml及玻璃數粒，煮沸回流水冷卻至室溫，用蒸餾水稀釋至1升，貯存在棕色試劑瓶中。

2. 磷鎢酸應用液：取10ml磷鎢酸貯存液，以蒸餾水稀釋至100ml。

3. 0.3 mol/L鎢酸鈉溶液：稱取鎢酸鈉（Na2WO42H2O，MW329.36）100g，用蒸餾水溶解后稀釋至1升。

4. 0.33mol/L硫酸：取18.5ml濃硫酸，加入500ml蒸餾水中，然后用蒸餾水稀釋至1升。

5. 鎢酸試劑：在800ml蒸餾水中，加入50ml，0.3mol/L鎢酸鈉溶液，0.05ml濃磷酸和 50ml，0.33mol/L硫酸，混勻，在室溫中可穩定數月。

6. lmol/L碳酸鈉溶液：稱取10.6g無水磷酸鈉溶液在蒸餾水中，并稀釋至1升，置塑料燒瓶內，如有混濁，可過濾后使用。

7. 6.0 mol/L尿酸標準貯存液：取60mg碳酸鋰（AR）溶解在40ml蒸餾水中加熱到60℃，使其完全溶解，準確稱取尿酸（MW168.11）100.9mg，溶解于碳酸鋰溶液中，冷卻置室溫，移入1000ml容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，貯存在棕色瓶中。

二、實驗操作：于3支16mm×l00mm試管（測定，標準和空白）中各加4.5ml鎢酸試劑，分別加人0.5ml血清，0.5ml標準應用液和0.5ml蒸餾水，混勻后靜止數分鐘，測定管離心沉淀，然后按下表操作：

混勻，室溫放置20分鐘后，用分光光度在彼長660nm，比色杯光徑1.0cm，以空白管調零，讀取各管吸光度。

三、計算：

血清尿酸μmol/L=測定管吸光度／標準管吸光度×300

參考值：男性149-461 μmol/L（2.57-7mg/dL）

女性89-357umol/L（1.5-6mg/dL）

1. 紅細胞內存在多種非特異性還原物質，因此用血清或血漿測定比用全血好。

2. 用草酸鉀與鎢酸鈉容易形成不溶性磷鎢酸鉀，造成顯色液混濁，不能用草酸鉀抗凝劑。

3. 血清與尿液標本中的尿酸在室溫可穩定3天，尿液標本冷藏后，可引起尿酸鹽沉淀，此時可調節PH至7.5-8.0，并將標本加熱至50℃，待沉淀溶解后再進行測定。

4. 尿酸在水中溶解度極低，但易溶于碳酸鹽溶液中，配制標準液時，加入碳酸鋰并加熱助溶，如無碳酸鋰，可用碳酸鉀或碳酸鈉代替。