實驗概要
1.學習蛙離體心臟灌流方法。
2.觀察Na 、K 、Ca2 、H 、腎上腺素、乙酰膽堿等因素對心臟活動的影響。
實驗原理
心臟的正常節律性活動需要一個適宜的內環境（如Na 、K 、Ca2 等的濃度及比例、pH值和溫度），而內環境的變化則直接影響到心臟的正常節律性活動。在體心臟還受交感神經和迷走神經的雙重支配，交感神經末梢釋放去甲腎上腺素，使心肌收縮力加強，傳導速度加快，心率加快；迷走神經末梢釋放乙酰膽堿，使心肌收縮力減弱，心肌傳導速度減慢，心率減慢。將失去神經支配的離體心臟保持于適宜的理化環境中（如任氏液），在一定時間內仍能產生自動節律性興奮和收縮。而改變任氏液的組成成分，離體心臟的活動就會受到影響。
主要試劑
任氏液、1％NaCl、2％CaCl2、1％KCl、3%乳酸、1：10000腎上腺素、1：10000乙酰膽堿等。
主要設備
蛙類常用手術器械一套、玻璃分針、蛙板、蛙釘、蛙心插管、蛙心夾、試管夾、滴管、試劑瓶、燒杯、雙凹夾、萬能支架、細線。
實驗材料
蛙
實驗步驟
1.標本的制備
（1）離體蛙心標本制備（斯氏蛙心插管法） 取蟾蜍一只，打開胸腔，暴露心臟。在主動脈干下方穿雙線，一條在左主動脈上端結扎作插管時牽引用；另一根在動脈球上方打一活結備用（用以結扎和固定插管）。
玻璃分針將心臟向前翻轉,在心臟背側找到靜脈竇,在靜脈竇以外的地方做一結扎(切忽扎住靜脈竇),以阻止血液繼續回流心臟（也可不進行此操作）。
左手提起左主動脈上方的結扎線，右手持眼科剪在左主動脈根部（動脈球前端）沿向心方向剪一斜口，將盛有少許任氏液、大小適宜的蛙心插管由此開口處輕輕插入動脈球。當插管尖端到達動脈球基部時，應將插管稍向后退(因主動脈內有螺旋瓣會阻礙插管前進)，并將插管尾端稍向右主動脈方向及腹側面傾斜，使插管尖端向動脈球的背部后方及心尖方向推進，在心室收縮時經主動脈瓣進入心室。注意插管不可插得過深，插管的斜面應朝向心室腔，以免插管下口被心室壁堵住。
若插管中任氏液面隨心室的收縮而上下波動，則表明插管進入心室，可將動脈球上已準備好的松結扎緊，并固定于插管側面的鉤上，以免蛙心插管滑出心室。剪斷結扎線上方的血管，輕輕提起插管和心臟，在左右肺靜脈和前后腔靜脈下引一細線并結扎，于結扎線外側剪去所有相連的組織則得到離體蛙心。此步操作中應注意靜脈竇不受損傷并與心臟連結良好。最后，用任氏液反復換洗插管內的任氏液，直到插管中無殘留血液為止。此時，離體蛙心標本制備成功，可供實驗。
2.實驗項目
（1）記錄心臟在只有任氏液時心臟的活動情況，并將其作為正常對照。
（2）Na 的作用：用吸管吸出插管中的任氏液后，換以等量的1％氯化鈉溶液，觀察心臟活動的變化。有變化出現時，應立即將插管內液體吸出，并以等量任氏液換洗2～3次，至心跳恢復正常。
（3）Ca2 的作用：將1～2滴2％的氯化鈣溶液加入灌流液中，觀察心臟活動的變化。有變化出現時，應立即以等量任氏液換洗數次，至心跳恢復正常。
（4）K 的作用：將1～2滴1％的氯化鉀溶液加入灌流液中，觀察心臟活動的變化。有變化出現時，應立即以等量任氏液換洗數次，至心跳恢復正常。
（5）腎上腺素的作用：將1～2滴1：10000腎上腺素加入灌流液中，觀察心臟活動的變化。有變化出現時，應立即以等量任氏液換洗數次，至心跳恢復正常。
（6）乙酰膽堿的作用：將1～2滴1：10000乙酰膽堿加入灌流液中，觀察心臟活動的變化。有變化出現時，應立即以等量任氏液換洗數次，至心跳恢復正常。
（7）酸的作用：將1～2滴3%的乳酸加入灌流液中，觀察心臟活動的變化。有變化出現時應立即以等量任氏液換洗數次，至心跳恢復正常。
注意事項
1.制備離體心臟標本時，勿傷及靜脈竇。
2.蛙心夾應在心室舒張期一次性夾住心尖，避免因夾傷心臟而導致漏液。
3.各種滴管應分開，不可混用。
4. 給藥后若效果不明顯，可再適量滴加，并密切注意藥物劑量添加后的實驗結果。給藥量必須適度，加藥出現變化后，就應立即更換任氏液，否則會造成不可挽回的后果，尤其是K＋，H 稍有過量，即可導致難以恢復的心臟停跳。
5.標本制備好后，若心臟功能狀態不好（不搏動），可向插管內滴加1～2滴2%CaCl2或1：10000腎上腺素，以促進（起動）心臟搏動。在實驗程序安排上也可考慮促進和抑制心臟搏動的藥物交換使用。