4. 即用,或放-20/-70℃保存3天。計算結果時乘以稀釋倍數50。(注意:不同的標本cGMP的水平可能有較大差異,請根據實際情況靈活掌握稀釋度)
5. 細胞培養上清或組織勻漿10倍稀釋(410ul的標本稀釋液+50ul樣本+20ul的1N HCI+20ul的1N NaOH)。
檢測程序
1. 加樣:每孔各加入標準品或待測樣品(已激活)100ul,將反應板充分混勻后置37℃120分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入第一抗體工作液100ul。將反應板充分混勻后置37℃60分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置37℃30分鐘。
6. 洗板:同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul,置37 ℃暗處反應15分鐘。
8. 每孔加入100ul終止液混勻。
9. 30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。
結果計算與判斷
1. 所有OD值都應減除空白值后再行計算。
2. 以標準品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0 pmol/ml為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。
3. 根據樣品OD值在該曲線圖上查出相應cGMP含量,再乘上稀釋倍數即可。
試劑盒性能
1. 靈敏度:最小的cGMP 檢測濃度小于15pmol/ml。
2. 特異性:可同時檢測重組或天然的大鼠cGMP。不與大鼠其它細胞因子有交叉反應。
3. 重復性:板內、板見變異系數均小于8.9%。
注意事項
1. 以上標準孔及待測樣品均建議做復孔,每次測定應同時做標準曲線。
2. 洗滌過程很關鍵。洗滌不充分將導致精確度誤差及OD值錯誤地升高。
3. 板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。
4. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。
5. 本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷!