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  • 發布時間:2019-07-04 23:49 原文鏈接: 大鼠環磷酸鳥苷(cGMP)ELISA檢測法


         4.   
    即用,或放-20/-70保存3天。計算結果時乘以稀釋倍數50注意:不同的標本cGMP的水平可能有較大差異,請根據實際情況靈活掌握稀釋度)

         5.   細胞培養上清或組織勻漿10倍稀釋(410ul的標本稀釋液+50ul樣本+20ul1N HCI+20ul1N NaOH)

    檢測程序

    1.          加樣:每孔各加入標準品或待測樣品(已激活)100ul,將反應板充分混勻后置37120分鐘。

    2.          洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。

    3.          每孔中加入第一抗體工作液100ul。將反應板充分混勻后置3760分鐘。

    4.          洗板:同前。

    5.          每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置3730分鐘。

    6.          洗板:同前。

    7.          每孔加入底物工作液100ul,置37 暗處反應15分鐘。

    8.          每孔加入100ul終止液混勻。

    9.          30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。

    結果計算與判斷

    1.          所有OD值都應減除空白值后再行計算。

    2.          以標準品2000100050025012562.531.20 pmol/ml為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。

    3.          根據樣品OD值在該曲線圖上查出相應cGMP含量,再乘上稀釋倍數即可

    試劑盒性能

                 1.   靈敏度最小的cGMP 檢測濃度小于15pmol/ml

    2.        特異性:可同時檢測重組或天然的大鼠cGMP不與大鼠其它細胞因子有交叉反應。

    3.        重復性:板內、板見變異系數均小于8.9%。

    注意事項

                 1.   以上標準孔及待測樣品均建議做復孔,每次測定應同時做標準曲線。

     2.   洗滌過程很關鍵。洗滌不充分將導致精確度誤差及OD值錯誤地升高。

                 3.   板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥

                 4.   本試劑盒宜置4oC冰箱保存。

     5.   本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷!


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