摘要: RNA提取應該說已經成為了一種常見的分子生物學操作步驟了,但是不少科研人員仍然煩惱著如何尋找一種最好的方法,或者找到一種適合于特殊用途方法。比如說傳統的血液標本表達譜芯片實驗需要先把有核細胞從全血中分離出來,加白細胞分離液、離心等步驟,比較繁瑣,如果能進行全血的提取,那就再好不過。
RNA提取應該說已經成為了一種常見的分子生物學操作步驟了,但是不少科研人員仍然煩惱著如何尋找一種最好的方法,或者找到一種適合于特殊用途方法。比如說傳統的血液標本表達譜芯片實驗需要先把有核細胞從全血中分離出來,加白細胞分離液、離心等步驟,比較繁瑣,如果能進行全血的提取,那就再好不過。
目前有一些公司已經生產了相關試劑,可以從全血中直接提取RNA,來自中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所動物醫學實驗室,以及博奧生物芯片北京國家工程研究中心的科研人員推薦了北京百泰克生物公司的RNA全血提取試劑盒。
博奧生物芯片北京國家工程研究中心:
我們比較了不同公司的產品后,認為北京百泰克生物公司生產的TRI pure LS Reagent用于全血有核細胞的RNA抽提效果較好,可以滿足基因表達譜芯片的分析要求。一般1ml的全血可以得到10μg左右的total RNA,足夠滿足芯片分析的需要。
在臨床上采血時,可以先把TRI pure LS Reagent分裝750ul到1.5ml的離心管中。血液樣本可以先抗凝處理(EDTA抗凝或者其他抗凝方式都可),然后取250ul全血樣品加入到750ul的TRI pure LS Reagent中,用移液槍反復抽打并振蕩混勻,在室溫裂解5min-10min,直至血細胞充分發生裂解。然后可把此裂解液保存在-20℃下可達2個月,-80℃可達半年。在此期間,可以把該裂解液運輸到博奧生物公司進行RNA的抽提,運輸過程可以4℃ 1天,-20℃ 一周。
全血樣品溶解在TRI pure LS Reagent試劑后的狀態:
RNA電泳圖:
圖1 泳道1與2,在-80度保存一個月后的提取結果。第M泳道:標準的Hela細胞RNA
中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所:
百泰克公司的血液(液體樣品)總RNA快速提取試劑盒(離心柱型)產品,在提取組織病料中細胞總RNA時,發現較本實驗常用的提取方法在總