1.麻醉后將頭部同定于動物實驗用立體定向架卜，切開有額頂頭皮，用微型鉆磨去顱骨形成5ram直徑大小網形骨窗
2.在手術顯微鏡下剪開硬腦膜，用微量注射器將10％BDA溶液(美國Molecular Probes公司產品)緩慢注入右側的感覺運動區皮質(sensorimotor cortex)內。注射時將微量注射器同定在一 體定向支架上，選擇無血管區作為注射點，每個注射點分別在距皮層表面0．5、1．0和2．0mm處各注藥一次，每次劑量0.5微升 。每次注射后針頭滯留10min， 然后緩慢進退針。每個動物接受10個皮層注射點，BDA注射總量為2100微升。
3.注射完畢后用薄層明膠海綿覆蓋腦表面，縫合頭皮。
4.2周后再次麻醉動物，打開胸腔，用4 生理鹽水和4％多聚甲醛液行心臟灌注后，取出大腦和脊髓組織，置于4％多聚甲醛液中4~C保存，待處理。
BDA染色顯影：
1.分別取大腦和各段脊髓組織，脊髓分別取上頸段(C )，胸段(Ts嘏)，腰段(L． )，
用冰凍切片機連續切片，組織切片厚度為40 m。
2.采用自由漂乳法將組織切片先后在以下溶液中孵化：
含0．1％H2O2的甲醇溶液10min、含0．5％Triton x—IOOPBS溶液(PBS—T)30min，抗生物素蛋白一生物素一
過氧化物酶復合液(avi(1inIbi0tin—per0xidase，美國Vector Laboratories公司產品)lh；用PBS-T液沖洗組織切片兩次，每次各10min，最后在二氨基聯苯胺(Vector laboratories公司產品)中顯影5rain。
3.上玻片、風干、脫水及蓋玻片覆蓋。