常用血細胞化學染色原理和臨床意義

發布時間：2019-08-15 20:02 原文鏈接：常用血細胞化學染色原理和臨床意義

（1）過氧化物酶染色的原理和臨床意義

[原理]　粒細胞和單核細胞胞漿中含有的過氧化物酶（peroxidase，POX）能將底物過氧化氫分解，產生新生態氧，它將四甲基聯苯胺氧化為聯苯胺藍。聯苯胺藍自我脫氫氧化，顯棕色四甲基苯醌二胺，再加入亞硝基鐵氰化鈉與聯苯胺藍結合，可形成穩定的藍色顆粒，定位于細胞漿內酶所在的部位。

[臨床意義]　

臨床上主要用于急性白血病類型的鑒別：急性淋巴細胞白血病原、幼淋巴細胞POX染色均呈陰性反應；急性粒細胞白血病　原粒細胞POX染色呈局灶分布的陽性反應；急性早幼粒細胞白血病　顆粒增多的早幼粒細胞POX染色呈強陽性反應；急性單核細胞白血病原、幼單核細胞POX染色多呈細小顆粒弱陽性反應。

（2）過碘酸-雪夫染色的原理和臨床意義

[原理] 過碘酸-雪夫（Pexiodic acid-schiff，PAS）染色又稱糖原染色。胞漿內存在的糖原或多糖類物質（如黏多糖、黏蛋白、糖蛋白、糖酯等）中的乙二醇基（CHOH-CHOH）經過碘酸（Periodic acid）氧化，轉變為二醛基（CHO-CHO），與雪夫（Schiff）試劑中的無色品紅結合，形成紫紅色化合物而沉積于胞漿中糖原類物質所存在的部位。該反應稱為過碘酸-雪夫（PAS）陽性反應。

[臨床意義]

1）急性白血病類型的鑒別紅白血病的幼紅細胞PAS染色多呈陽性反應，陽性率高，反應強；成熟紅細胞有時亦可為陽性；急性淋巴細胞白血病的原、幼淋巴細胞PAS染色多為紅色顆粒或塊狀陽性反應；急性粒細胞白血病的原粒細胞呈陰性或胞質呈彌漫淡色陽性反應；急性早幼粒細胞白血病　異常早幼粒細胞的PAS染色為陽性反應；急性單核細胞白血病原、幼單核細胞PAS染色陽性反應呈彌漫分布的紅色細顆粒，巨核細胞白血病原巨核細胞PAS染色呈陽性或強陽性反應，表現為紅色顆粒或塊狀。

2）各類貧血的鑒別 MDS、缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血（曾稱地中海貧血）的幼紅細胞PAS染色多為陰性反應，有時可出現陽性反應；巨幼紅細胞貧血、溶血性貧血、再障的幼紅細胞PAS染色為陰性。

3）其他細胞類型的鑒別戈謝細胞呈強陽性反應；尼曼－匹克細胞PAS染色為弱陽性，空泡中心陰性。非霍奇金淋巴細胞PAS染色呈陽性反應；R-S細胞則為弱陽性或陰性反應。骨髓內轉移的腺癌細胞PAS染色呈強陽性反應，表現為紅色顆粒或塊狀。

（3）中性粒細胞堿性磷酸酶染色的原理和臨床意義（偶氮耦聯法，Kaplow）

[原理] 中性粒細胞內堿性磷酸酶（neutrophile alkaline phosphatese, NAP）在pH9.2-9.8時，能水解磷酸萘酚鈉，釋放出磷酸與萘酚，再以重氮鹽與萘酚耦聯成不溶性有色沉淀于胞質內酶所存在的部位。

[臨床意義]

1）白血病急性粒細胞白血病NAP陽性率及積分值均降低，急性淋巴細胞白血病NAP積分值明顯增高；慢性粒細胞白血病（無繼發感染時）NAP積分值顯著降低，甚至為“0”，類白血病反應NAP積分值明顯增高，是兩者鑒別的重要檢測項目；慢性中性粒細胞白血病NAP積分值顯著增高，常在200分/100NC以上，也有利于與慢性粒細胞白血病鑒別。

2）其他血液病

各類貧血　再障時NAP積分值增高，陣發性睡眠性血紅蛋白尿癥（PNH）和MDS時NAP積分值一般減低。因此NAP檢測有助于與PNH、MDS等疾病的鑒別。

真性紅細胞增多癥時NAP積分值顯著增高，繼發性紅細胞增多癥NAP積分正常或降低，這是兩者的鑒別方法之一。其他慢性骨髓增生性疾病，如骨髓纖維化、原發性血小板增多癥等，NAP積分值增高。

惡性組織細胞病時NAP積分值明顯減低，而反應性組織細胞增多時NAP積分值往往增高，有助于兩者鑒別。

細菌性感染時NAP積分值增高，病毒感染或寄生蟲、立克次體感染時NAP積分值一般正常或降低。該檢測對鑒別細菌感染與其他感染有一定價值。

（4）氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色的原理和臨床意義

[原理] 細胞內的氯乙酸AS－D萘酚酯酶（naphythol AS-D chloroacetate esterase,NAS-DCE）水解基質液中的氯乙酸AS－D萘酚，產生AS－D萘酚，進而與基質液中的重氮鹽偶聯形成不溶性的有色沉淀，定位于細胞質內酶所存在的部位。本試驗常用的重氮鹽為堅牢紫醬GBC，形成的有色沉淀為紅色。NAS－DCE幾乎僅出現在粒細胞，其特異性高，因此又稱為“粒細胞酯酶”、“特異性酯酶”。

[臨床意義] 臨床上主要用于急性白血病類型的鑒別急性粒細胞白血病和急性早幼粒細胞白血病原粒細胞NAS－DCE染色多呈（＋）-（＋＋），白血病性早幼粒細胞呈（＋＋）-（＋＋＋）；急性單核細胞白血病　原、幼單核細胞多呈陰性反應；急性淋巴細胞白血病原、幼淋巴細胞呈陰性反應。

（5）中性非特異性酯酶染色的原理和臨床意義

[原理] 中性非特異性酯酶包括醋酸AS-D萘酚酯酶(naphytholAS-D acetate esterase,NAS-DAE)染色和α-醋酸萘酚酯酶（α-naphythyol acetate esterase , α-NAE）染色。細胞內的α-醋酸萘酚酯酶（α-naphythyol acetate esterase , α-NAE）在pH中性的條件下水解基質液中的α-醋酸萘酚，釋放出α-萘酚，進而與基質液中的重氮鹽偶聯形成不溶性的有色沉淀，定位于細胞質內酶所在的部位。

[臨床意義] 主要用于急性白血病類型的鑒別。NAS－DAE染色屬于中性非特異性酯酶染色，在鑒別白血病類型時需同時做NaF抑制試驗。急性粒細胞白血病的原粒細胞NAS－DAE染色可呈陽性反應，且不被氟化鈉抑制；急性早幼粒細胞白血病的白血病性早幼粒細胞NAS－DAE染色為陽性或強陽性反應，亦不被氟化鈉所抑制；急性單核細胞白血病的原、幼單核細胞NAS－DAE染色多呈陽性或強陽性反應，但能被氟化鈉抑制；急性粒－單核細胞白血病的陽性反應的單核細胞系白血病細胞能被氟化鈉抑制，而粒系白血病細胞則不被抑制；急性淋巴細胞白血病的原、幼淋巴細胞呈陰性或弱陽性反應，且不被氟化鈉抑制。

（6）堿性α-丁酸萘酚酯酶染色的原理和臨床意義

[原理] 細胞內的α-丁酸萘酚酯酶（α-naphythyol butyrate esterase, α-NBE）在pH堿性條件下水解基質液中的α-丁酸萘酚，釋放出α-萘酚，后者與基質液中的重氮鹽耦聯形成不溶性的有色沉淀，定位于細胞質內酶所存在的部位。本試驗常用的重氮鹽為堅牢紫醬GBC，形成的有色沉淀為紅色。α-NBE主要存在于單核細胞中，其陽性產物能被氟化鈉抑制，而其他細胞系列的陽性產物不能被氟化鈉抑制。

[臨床意義] 常用于急性白血病類型的鑒別。急性粒細胞白血病的原粒細胞和早幼粒細胞呈陰性反應，少數為弱陽性反應；急性單核細胞白血病的　原、幼單核細胞多呈陽性反應，能被氟化鈉抑制；急性淋巴細胞白血病的原、幼淋巴細胞常呈陰性反應；多毛細胞白血病的多毛細胞呈彌散分布、顆粒細小的陽性反應，亦可見聚成半月形的粗顆粒，不被氟化鈉抑制；惡性組織細胞病的異常組織細胞可呈陽性，但不被氟化鈉抑制。

（7）酸性磷酸酶染色的原理和臨床意義.

[原理] 細胞內的酸性磷酸酶在酸性條件下，將基質中的磷酸萘酚AS－BI水解，釋出萘酚AS－BI，再與重氮鹽耦聯，形成不溶性有色沉淀，定位于胞漿中。

[臨床意義]

1）白血病類型鑒別多毛細胞白血病的多毛細胞ACP染色呈強陽性或中度陽性反應，并耐L－酒石酸抑制作用；急性單核細胞白血病的原、幼單核細胞ACP染色為強陽性反應；急性淋巴細胞白血病的原淋巴細胞ACP染色常呈弱陽性反應；急性粒細胞白血病的原粒細胞對ACP