CsCl法從組織中提取RNA

液氮 組織胍溶液 十二烷基肌氨酸鈉 CsCl 組織重懸液   乙酸鈉 酚 氯仿 異戊醇 異戊醇 無水乙醇

組織搗碎機 離心機

一 材料與設備

1）液氮

2）組織胍溶液：590.8 g 異硫氰酸胍溶于 400ulDEPC 處理的水中，加入 25 mmol/LTris-Cl(pH7.5).20 ml0.5mol/LEDTA(pH8.0)，攪拌過夜，加水至 950 ml，過濾, 最后加 50 ml，β-巰基乙醇。

3）20%(m/V) 十二烷基肌氨酸鈉

4）5.7mol/LCsCl

5）組織重懸液:5 mmo/LlEDTA，0.5%(V/V) 十二烷基肌氨酸鈉，5%β-巰基乙醇

6）3mol/L 乙酸鈉 pH5.2

7）酚：氯仿：異戊醇 (25:24:1)，氯仿：異戊醇 (24:1)

8）組織搗碎機

9）離心機

10）無水乙醇.


二 操作方法

1) 從動物體快速取出組織，切成小于 2 g 的小組織塊. 在液氮中速凍，每 2 g 小組織塊加人 20 ml 組織胍溶液 (不含十二烷基肌氨酸鈉）后立即在組織搗碎機中研磨 2?3 次，每次 10s. 速凍是關鍵，因為將組織放在胍溶液中等候搗碎時，RNA 會發生降解

2) 于 12℃12OOOg 離心 10mim。上清加人 0.1 倍體積的 20% 十二烷基肌氨酸鈉，65℃ 加熱 2 min

3) 每毫升液體加人 O.lgCsCl，并使之溶解。將樣品加于已高壓及硅化處理離心管中的 9 ml5.7mol/LCsCl 墊層之上。于 22℃113000 g 離心過夜。

4) 小心移去上清. 倒轉離心管以使剩余液體流干。切下離心管的底部（含 RNA 沉淀）將其放在一個 50 ml 塑料管中，加人 3 ml 組織重懸液在 4℃ 溶解沉淀，可過夜或更久。

5) 依次以酚：氯仿：異戊醇（25:24：1）和氯仿：異戊醇 (24:1) 抽提溶液。

6）加入 0.1 倍體積的 3moI/LPH5.2 的乙酸鈉緩沖液和 2.5 倍體積的無水乙醇，沉淀，重溶 RNA 于水，定量和儲存。