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一、用超速離心法從組織中分離細胞核
1. 切下動物組織，放入置于冰上的平皿中，用冰冷的 PBS 沖洗。
2. 加少量蔗糖Ⅰ溶液，用剪刀或剃須刀片將組織切碎，轉入一個干凈試管中，加蔗糖Ⅰ溶液至終體積為每克組織 10 ml。
3. 用特氟隆研杵在電動勻漿器中將細胞勻漿裂解。
4. 于 1000 g 低溫離心 5 分鐘收集細胞核。
5. 用 2 ml 蔗糖Ⅱ，用移液管猛力吹打重懸沉淀，然后加蔗糖Ⅱ至每克組織 10 ml。
6. 離心：
(1) 取一個 SW41 離心管（Beckman)，加入 2 ml 蔗糖Ⅱ，再將上一步所得懸液加于其上。
(2) 于 20000 r/min，4℃ 用 SW41 轉頭離心 1 小時，沉淀即是去除了膜成分與細胞碎片的干凈的細胞核。
7. 吸去上層的細胞碎片和透明的墊層，一定要吸徹底，以免沉淀受到任何細胞碎片的污染。然后用干凈的 Kimwipe 吸水紙將離心管內壁擦干凈。
8. 加入 1 ml 蔗糖Ⅲ溶液，將細胞核沉淀刮下，吹打重懸。再用 1 ml 蔗糖Ⅲ清洗管壁以減少損失。
9. 于 1000 g，4℃ 離心 5 分鐘收集細胞核，用 5 ml 冷的洗液重懸沉淀，于 1000 g 4℃ 離心 5 分鐘收集細胞核。
10. 用細胞核保存緩沖液重懸沉淀（每克組織加 200 μl），迅速放入液氮罐。
二、用低速離心法從組織或培養細胞中分離細胞核
1. 前述第一、二步，切下組織用冰冷的 PBS 沖洗。
2. 在精胺-亞精胺勻漿緩沖液中將細胞勻漿化。
3. 裂解后，稀釋樣品，加 SSHB 至每克組織（或每 108 細胞）10 ml，以充分洗脫粗制細胞核。
4. 于 1000 g 離心 5 分鐘，收集沉淀，然后用 5 ml SSHB 重懸，再于 1000 g 離心 5 分鐘收集干凈細胞核。
5. 用 1 ml NSB 重懸干凈細胞核，轉移至 1.2 ml 離心管，1000 g 離心 5 分鐘收集細胞核。
6. 每克組織（或每 108 細胞）用 200 μl NSB 重懸沉淀，迅速放入液氮中冷凍保存。
三、用膨脹裂解法從培養細胞中分離細胞核
1. 用貼有膠帶的特氟隆刀片或乳膠刮刷將細胞刮入冰冷的 PBS。
2. 每 100 mm 培養皿用 8 ml 冷 PBS，經二次懸浮與 800 g 離心清洗細胞。
3. 往細胞沉淀中加 4 ml RSB，置于冰上 5 分鐘，使之在低滲緩沖液中膨脹裂解。
4. 加 10% Triton X-100 至終濃度 0.1%，混勻，再加 4 mol/L KCl 至終濃度 140 mmol/L。
5. 在一個 Bounce 手動勻漿器中勻漿 10~15 沖程，顯微鏡下監視裂解過程。如果 15 個沖程裂解不充分，則有必要在前一步提高 Triton X-100 的濃度（如有必要最高可到 0.5% )。
6. 100% 離心 5 分鐘收集細胞核，用冷的洗液（2 ml/培養皿）重懸，再離心。
7. 用細胞核保存緩沖液重懸沉淀，放入液氮中凍存。
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