急性中毒物質的快速篩選和檢測（三）

　　APHO-E-01-2005鼠藥(毒鼠強、氟乙酰胺、敵鼠等)中毒殘留物的快速篩選檢測　　　　

在我國，每年食物中毒事件中，鼠藥中毒占有相當大的比例。殺鼠藥對人、畜皆具有不同程度的毒性，誤食或人為投毒食用后，嚴重者有致命的后果。目前常用的殺鼠藥有敵鼠、安妥和磷化鋅。“毒鼠強”和“氟乙酰胺”雖然早已被國家所禁令使用，而近年來鼠藥中毒事件仍以“毒鼠強”、“氟乙酰胺”和“敵鼠”為主。幾種鼠藥的化學性質與定性方法如下。　　　　

        1.化學性質：

　　1.1毒鼠強：毒鼠強又名沒鼠命，三步倒，四二四等。輕質粉末。熔點250～254℃。在水中溶解度約0.25mg/ml，在丙酮、乙酸乙酯、苯中的溶解度大于水，溶于二甲亞砜。可經消化道及呼吸道吸收。不易經完整的皮膚吸收。哺乳動物口服最低致死劑量為0.10mg/kg。口服6～12 mg即為人的致死量，劑量大時，3分鐘即可致死。

　　1.2氟乙酰胺：氟乙酰胺又稱敵蚜胺、1080，也稱“一掃光”，對人畜具有劇毒性，且可造成人畜二次中毒。氟乙酰胺在干燥條件下比較穩定，易溶于水，在中性和酸性水溶液中可水解成氟乙酸，在堿性水溶液中可水解成氟乙酸鈉釋放出氨。

　　1.3敵鼠鈉鹽：敵鼠的化學名為2-二苯基乙酰基-1，3-茚二酮。一種抗凝血的高效殺鼠劑，可使內臟出血不止而死亡。市售的是1%敵鼠粉劑和1%敵鼠鈉鹽。對人畜有劇毒。鈉鹽口服0.06～0.25克可引起中毒，0.5～2.5克可致死。

　　1.4安妥：安妥的化學名稱為甲萘硫脲。對人的致死量為4～6克。純品為無色結晶，工業品為灰紫色粉末，不溶于水，稍溶于硝酸，可溶于堿液及有機溶劑，易溶于丙酮。

　　1.5磷化鋅：磷化鋅也是一種常用的殺鼠藥。它是深灰色或近似黑色、有閃光的重質粉末，易溶于酸并產生無色具有蒜臭的劇毒磷化氫氣體。誤食后在胃酸作用下，放出磷化氫，腐蝕刺激消化道，吸收入血后，能破壞機體代謝，并能作用于內分泌及神經系統，毒物經肝臟解毒，腎臟排泄，故可引起肝腎的損害。

　　2.檢測用試劑

　　2.1毒鼠強定性試液包

　　2.2敵鼠鈉鹽定性試液包

　　2.3安妥定性試紙

　　2.4氟乙酰胺定性試液包

　　3毒鼠強、敵鼠鈉鹽、安妥測定前的樣品處理

　　3.1無色液體(飲用水等)：樣品不需處理，直接進入樣品測定。

　　3.2液體樣品(牛奶、豆漿等)：取1~3ml放入比色管中，加入5ml乙酸乙酯，上下振搖50次以上，靜置后取上清液測定。

　　3.3固體(糧食、面粉、毒鉺等)或半固體(嘔吐物、胃內容物、剩余飯菜等)樣品：取1~3克放入比色管中，加入5ml乙酸乙酯，充分振搖，靜置后用濾紙過濾，取澄清液測定。　　 　　4毒鼠強測定：取樣品處理后的上清液或濾液2ml以上于10ml比色管中，在85℃±5℃的水浴中加熱揮干乙酸乙酯，放至室溫后，向試管中加入2滴毒鼠強顯色劑，加入5ml(約115滴)毒鼠強試液(強酸溶液，謹慎操作)，輕輕搖動后，將試管放回水浴中，加熱3~5分鐘取出，觀察顏色變化。同時做空白和陽性對照試驗。陽性反應為淡紫紅到深紫紅色。陰性為試劑本色。檢出下限5μg。

　　4.1注意事項：①空白對照試驗，是取與檢樣相同(不含毒鼠強)的物質與檢樣同時操作，以便于觀察對比。對于嘔吐物、胃內容物等樣品，一定要加陽性對照試驗。②有些樣品的提取液帶有較深的顏色，應加大提取液的用量，在提取液中加少量活性炭，或中性氧化鋁，振搖脫色，過濾后濾液揮干測定。經過脫色的樣品，毒鼠強會有一些損失，一般在30~40%。③本方法為快速篩選方法，工作中可根據實際情況加大樣品和乙酸乙酯用量。提取后的乙酸乙酯應盡量少含水分(一是不易揮干，二是水分中可能會含有糖、纖維素等成分，干擾測定)，如果含的水分多，可加入無水硫酸鈉進行脫水后過濾，并將乙酸乙酯揮干后測定。④本方法不適于血液和組織器官樣品的測定。⑤醛類物質對測定有干擾。排除方法：液體樣品加熱煮沸2分鐘，固體樣品置90℃烘箱加熱30分鐘后再測定。⑥毒鼠強的檢測目前無國家標準分析方法，對重要案件的處理要慎重，應采用氣相或液相色譜做進一步對照確定。對于中毒案件，還可根據中毒者的中毒癥狀作參考。⑦毒鼠強顯色劑有效期1年，陽性對照試驗無反應時不可再用。

　　4.2毒鼠強定性試液的配制：如果有定制包裝的毒鼠強定性試液包，可以直接使用。如果有毒鼠強顯色劑，可按以下方法配制毒鼠強定性試液。

　　毒鼠強顯色劑為茶色或棕色帶有微紅色的酸性液體，配置成定性液與毒鼠強反應后變成淡紫紅到深紫紅色。陰性為試劑本色

　　取200ml蒸餾水或純凈水于燒杯中，緩慢加入300ml優級純硫酸，邊加邊攪拌，等溶液涼至室溫后，用水補齊至500ml即為60%的硫酸，將毒鼠強顯色劑(10ml/支)小心加入，混勻后即為毒鼠強定性液。每份樣品使用5ml。顯色劑與60%硫酸也可單獨使用，即向樣品中加入2~3滴顯色劑，再加入5ml 60%的硫酸，具體使用方法詳見毒鼠強快速定性試液包使用說明書。　　

　　5敵鼠鈉鹽測定：將試紙對折裁開，將處理后的樣品溶液1滴于一片試紙上，(根據對樣品的懷疑程度。可等溶液稍干后，追加樣品溶液的滴數以提高方法的靈敏度)，待溶液稍干后，在滴加樣品溶液處滴上1滴敵鼠顯色劑，如果出現磚紅色斑點為強陽性反應，如果出現紅色環狀為弱陽性反應。方法靈敏度：檢出限量為5微克。　　

　　6安妥測定：將提取液1滴于安妥檢測試紙片上，并噴上霧水或用水使紙片濕潤，觀察試紙顏色變化，呈現黃色，示有安妥存在(最低檢出限為0.02mg/g，ml)。　　

　　7氟乙酰胺測定

　　方法一

　　7.1樣品處理：無色液體可直接測定。有顏液體，可加少量活性炭或中性氧化鋁振搖脫色，過濾后測定。固體樣品研碎后取2～5克加3倍于樣品重的蒸餾水或純凈水，半流體樣品取2～5克加等量于樣品重的蒸餾水或純凈水，振搖提取，過濾，將濾液煮沸濃縮至1ml左右測定。中毒殘留物或胃內容物樣品處理時，可適當加大取樣量。

　　7.2樣品測定：取待檢液1ml左右于試管中，加氫氧化鈉溶液10滴，加鹽酸羥胺溶液5滴，置沸水中水浴5分鐘(使其充分水解成氟乙酸鈉釋放出氨)。取出放冷，加鹽酸溶液9～10滴(調pH值3～5)后，加三氯化鐵溶液3～10滴(使其與氟乙酸反應)，陽性結果為粉紅或紫紅色，尤其在滴加后的液面上更為明顯(檢出限可達50μg/ml)。測定時做空白對照試驗，陰性結果為淺黃或黃色，有些空白對照為黃棕色絮狀沉淀，靜置后上層液變成無色或僅呈淺黃色。

　　7.3注意事項：①加鹽酸溶液9滴后要用pH試紙測試溶液pH值，若pH值太高(堿度過高)，加入三氯化鐵溶液時可產生紅棕色沉淀，影響結果判定，造成假陽性結果；若pH值太低(酸度過高)，加入三氯化鐵溶液后氟乙酰胺顯色不敏銳或不顯色，易造成假陰性結果。pH值可用氫氧化鈉溶液和鹽酸溶液反向調整。②空白對照試驗，是取與檢樣相同(不含氟乙酰胺)的物質與檢樣同時操作，以便于觀察對比。對于嘔吐物、胃內容物等樣品，應加陽性對照試驗。③本方法不適于血液和組織器官樣品的測定。④氟乙酰胺的檢測目前無國家標準分析方法，對重要案件的處理要慎重，應采用氣相或液相色譜做進一步對照確定。對于中毒案件，還可根據中毒者的中毒癥狀作參考。⑤三氯化鐵溶液放置時間長時會有少量沉淀產生，搖勻后使用。組合試劑的有效期為1年，陽性對照試驗無反應時不可再用。

　　方法二

　　奈氏試劑法。本方法也是測定氟乙酰胺方法中較好的方法，但由于所用的奈氏試劑中需要碘化汞(毒品)，需當地公安部門批準才能在試劑商店購買，這里僅提供檢驗方法。

　　7.4奈氏試劑的配制：將10g碘化汞和7g碘化鉀溶于10ml水中，另將24.4g氫氧化鉀溶于內有70ml水的100ml容量瓶中，并冷卻至室溫。將上述碘化汞和碘化鉀溶液慢慢注入容量瓶中，邊加邊搖動。加水至刻度，搖勻，放置2天后使用。試劑應保存在棕色玻璃瓶中，置暗處。

　　7.5檢測方法：將水溶性樣品溶液1ml于小試管中，加入1ml奈氏試劑，如含有氟乙酰胺，會出現黃紅—澄棕色沉淀，同時做空白對照試驗，20分鐘即可報告結果。檢出限為50μg/ml。注意：氨對本方法有干擾。試劑必須閉光保存。

　　8.磷化鋅測定：磷化鋅的檢測相對復雜些，要先經硝酸銀法預試為陽性后，再進行磷和鋅的檢驗，均呈陽性時，可判斷磷化鋅的存在。一般情況下，可疑物呈深灰色或近似黑色又經酸溶解釋放出蒜臭味時，即可考慮可能含有磷化鋅的存在。可送實驗室做進一步的驗證。

　　APHO-E-02-2005亞硝酸鹽中毒殘留物的快速篩選及食品中殘留量的快速檢測

　　亞硝酸鹽主要指亞硝酸鈉，亞硝酸鈉為白色至淡黃色粉末或顆粒狀，味微咸，易溶于水。外觀及滋味都與食鹽相似，并在工業、建筑業中廣為使用，肉類制品中也允許作為發色劑限量使用。由亞硝酸鹽引起食物中毒的機率較高。食入0.3～0.5克的亞硝酸鹽即可引起中毒甚至死亡。急性中毒原因多為：1.將亞硝酸鹽誤作食鹽、面堿等食用。2.摻雜、使假。3.投毒。4.食用了含有大量亞硝酸鹽的蔬菜，尤其是不新鮮的葉類蔬菜。慢性中毒(包括癌變)原因多為：1.飲用含亞硝酸鹽量過高的井水。2.食用含有超量亞硝酸鹽的肉制品。因此，測定亞硝酸鹽的含量是食品安全檢測中非常重要的項目。更是食物中毒后主要篩選的項目。

　　1方法原理按照國標GB/T 5009.33做成的速測管，與標準色卡比較定量。

　　2食鹽中亞硝酸鹽的快速檢測及食鹽與亞硝酸鹽的快速鑒別：用袋內附帶小勺取食鹽1平勺，加入到檢測管中，加入蒸餾水或純凈水至1ml刻度處，蓋上蓋，將固體部分搖溶，10分鐘后與標準色板對比，該色板上的數值乘上10即為食鹽中亞硝酸鹽的含量mg/ kg，(國標規定食鹽(精鹽)中亞硝酸鹽的限量衛生標準應≤2 mg/kg)。當樣品出現血紅色且有沉淀產生或很快退色變成黃色時，可判定亞硝酸鹽含量相當高，或樣品本身就是亞硝酸鹽。

　　3液體樣品測定：直接取澄清液體樣品1ml到檢測管中，蓋上蓋，將試劑搖溶，10分鐘后與標準色板對比，找出與檢測管中溶液顏色相同的色階，該色階上的數值即為樣品中亞硝酸鹽的含量mg/L(以NaNO2計)。(牛乳及豆槳也可直接檢測，結果不得超過0.25mg/L，有顏色的樣品可加入一些活性炭脫色過濾后測定)。

　　4固體或半固體樣品測定：取粉碎均勻的樣品1.0g或1.0ml至10ml比色管中，加蒸餾水或去離子水(純凈水)至刻度，充分震搖后放置，取上清液(或過濾或離心得到的上清液)1.0ml加入到檢測管中，蓋上蓋，將試劑搖溶，10分鐘后與標準色板對比，該色板上的數值乘上10即為樣品中亞硝酸鹽的含量mg/ kg，L(以NaNO2計)。如果測試結果超出色板上的最高值，可定量稀釋后測定，并在計算結果時乘上稀釋倍數(如從10ml比色管中取出1.0mL轉入另一支10ml比色管中，加水至刻度，從中取1.0mL加入到檢測管中測定，測試結果乘上100(倍稀釋)即為樣品中亞硝酸鹽的含量。

　　部分食品中亞硝酸鹽的限量標準(以NaNO2計)

　　5說明

　　5.1在生活飲用水的限量衛生標準中，僅有硝酸鹽的限定量≤20mg/L，未有亞硝酸鹽的指標。當某些還原物質以離子形態存在較多時，可將硝酸根離子還原成亞硝酸根離子，某些細菌也有這種作用。所以，生活飲用水中常存有亞硝酸鹽不能作為測定用稀釋液。5.2若顯色后顏色很深且有沉淀產生或很快退色變成淺黃色，說明樣品中亞硝酸鹽含量很高，須加大稀釋倍數重新試驗，否則會得出錯誤結論。

　　5.3對于陽性樣品應重復操作加以確定。

　　5.4微型超聲波溶解、清洗、提取器，可加速試劑溶解和便于對器皿的充分清洗。