雌激素檢測試劑盒依靠ES單克隆抗體來識別E1,E2,E3。 樣品中的ES和一個E2-酶結合物預先混合然后加入到每個微孔中競爭與包被在微孔表面的特異性抗體。
樣品中ES的濃度如果高于E2-酶結合物，ES將主要與抗體結合。反之樣品中ES的濃度如果低于于E2
-酶結合物，E2 -酶結合物將主要與抗體結合。通過洗滌步驟去除沒有反應的ES和過量的E2-酶結合物。
和微孔板中抗體結合的E2 -酶結合物催化底物發生反應產生有色物質。 通過一個孵育期用稀酸終止反應。
樣品中ES的濃度越高導致結合到微孔板抗體上的E2-酶結合物越少，從而產生的顏色越淡，吸光度越低。