原代細胞分離與培養

對于大部分科研人員來說，研究中一般用到均是現成的細胞系/株，我們只需要：進行細胞傳代和保種。然而，這些細胞系常常由于體外長期培養，而丟失原有生物學特性，對藥物處理的反應差距越來越大。因此，原代細胞的地位日漸凸顯，Paper中若有了原代細胞的數據都會添色不少。然而，就小編親生經歷，原代細胞分離著實是個技術活，今天我們就結合自身經驗，為大家介紹：腫瘤組織和正常組織的原代細胞的分離與培養方法。

一部分：原代細胞的基本知識

1. 什么是原代細胞培養?

原代細胞（Primary cells）：是指直接從機體取出的組織或細胞獲得單個細胞并在體外進行培養的細胞。這里的組織主要指：組織器官、外周血及胚胎等。

原代細胞培養：由于原代細胞生長緩慢，繁殖一定的代數停止生長（一般10代以內）。所以一般認為：培養的原代的第1和傳代到第10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。

2. 原代細胞與細胞系（cell lines）的區別

原代細胞和細胞系的比較：

原代細胞和細胞系的比較

3. 原代細胞的應用

由于原代細胞生物學特性未發生很大改變，Z接近和反映體內生長特性，因此是：

(1) 研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的工具；

(2)更好實現精準醫療的腫瘤診治模式，實現個體化精準用藥的目的。

第二部分：原代細胞分離和培養技術

原代培養的原理

將動物機體的各種組織從機體中取出，經各種酶(常用胰蛋白酶/膠原酶)、螯合劑(常用EDTA)或機械方法處理，分散成單細胞，置合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養。主要包括取材——分離——培養等3部分；

在原代細胞應用較多的包括：組織器官（如實體瘤、皮膚等）、懸浮細胞的取材等。

下面依次介紹：

一、腫瘤組織的取材

病人自體的原代腫瘤細胞由于更接近臨床患者標本，可以更好實現精準醫療的腫瘤診治模式，實現個體化精準用藥的目的。所以對病人自體腫瘤細胞體外分離與培養十分必要。

基本過程如下圖所示：

原代腫瘤細胞的分離步驟

備注：上圖細胞為肉瘤患者的原代細胞

具體步驟如下：

1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織，剔除包膜及壞死組織，無菌PBS清洗3-5次；切成約1mm³組織塊；

2. 加入2mmol 的 EDTA，搖勻后放置冰上約 30-60min；

3. 離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；

4. 消化期間，置于37°培養箱。每15min搖晃一次，消化時間根據腫瘤組織來定，約1-2h；

5. 待大部分組織塊消化成透明狀時，用 40μm 的細胞濾網過濾細胞，收集；

6. 用培養基重懸，置于培養箱培養。