分離人角膜內皮細胞
角膜內皮細胞的常規培養
培養內皮細胞球
| 實驗方法原理 | |
|---|---|
| 實驗材料 | 完整的人角膜 |
| 試劑、試劑盒 | CMF-SalineG 胰蛋白酶 EDTA DMEM F-12 GASP DMEM F-12 2FB:DMEM:Ham’sF-12 1:1 含2%FBS CMF GASP |
| 儀器、耗材 | 手術刀或單刃安全刀片 彎虹膜剪 275px(4-3 8 in.) Jeweler’s懾子 250px(4 in.) 角膜剪 19mm刃 尖頭 Colibri縫線鉗0.1 mm |
| 實驗步驟 | (a)用PBSA將角膜清洗3次，每次5 min。 (b)剪除殘留的鞏膜，結膜和虹膜。 (c)加人2 ml 1.2 U/ml中性蛋白酶II，4℃過夜，輕微攪動。 (d)將加人中性蛋白酶II的角膜放人4℃搖床搖30 min。 (e)用DMEM/F-12/GASP清洗角膜。 (f)解剖顯微鏡下，小心去除小梁網，剝離內皮層并用胰蛋白酶/EDTA消化37℃，30 min。 (g)加入同等體積的DMEM/F-12/2FB并拍散細胞。 (h)離心400g,10 min,棄去上清。 (i)加人1 ml培養基，輕柔的重懸細胞并計數。 |
| 注意事項 |
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