流式細胞儀的簡要介紹與注意事項

一、流式細胞儀的檢測范圍

1．流式細胞儀可以檢測細胞結構，包括：細胞大小、細胞粒度、細胞表面面積、核漿比例、DNA含量與細胞周期、RNA含量、蛋白質含量。

2．流式細胞儀可以檢測細胞功能，包括：細胞表面/ 胞漿/ 核的特異性抗原、細胞活性、細胞內細胞因子、酶活性、激素結合位點和細胞受體。

二、流式細胞儀的臨床應用

1．流式細胞術在腫瘤學中的應用：流式細胞術可以檢測腫瘤細胞增殖周期、檢測腫瘤細胞表面標記、癌基因表達產物、進行多藥耐藥性分析、檢測凋亡；

2．流式細胞術在血液學中的應用：檢測白血病和淋巴瘤細胞、活化血小板、造血干細胞（CD34+）計數、白血病與淋巴瘤的免疫分型、網織紅細胞計數、細胞移植的交叉配型和免疫狀態監測；

3．流式細胞術在免疫學中的應用：可以進行淋巴細胞及其亞群分析、淋巴細胞免疫分型、檢測細胞因子。

三、流式細胞儀的科研應用

主要有細胞動力學功能研究、環境微生物分析、流式細胞術與分子生物學研究。

四、流式細胞術常規檢測時的樣品制備

(一) 直接免疫熒光標記法

取一定量細胞（約1×106 細胞/ml），直接加入連接有熒光素的抗體進行免疫標記反應（如做雙標或多標染色，可把幾種標記有不同熒光素的抗體同時加入），孵育20～60分鐘后，用PBS（pH7.2 ～7.4）洗1～2次，加入緩沖液重懸，上機檢測。本方法操作簡便，結果準確，易于分析，適用于同一細胞群多參數同時測定。雖然直標抗體試劑成本較高，但減少了間接標記法中較強的非特異熒光的干擾，因此更適用于臨床標本的檢測。

(二) 間接免疫熒光標記法

取一定量的細胞懸液（約1X106 細胞/ml），先加入特異的第一抗體，待反應完全后洗去未結合抗體，再加入熒光標記的第二抗體，生成抗原-抗體-抗抗體復合物，以FCM檢測其上標記的熒光素被激發后發出的熒光。本方法費用較低，二抗應用廣泛，多用于科研標本的檢測。但由于二抗一般為多克隆抗體，特異性較差，非特異性熒光背景較強，易影響實驗結果。所以標本制備時應加入陰性或陽性對照。另外，由于間標法步驟較多，增加了細胞的丟失，不適用測定細胞數較少的標本。

五、質量控制和注意事項

流式細胞儀并非是完全自動化的儀器，準確的實驗結果還需要準確的人工技術配合，所以標本制備需要規范，儀器本身亦需要質量控制。

（一）流式細胞術免疫學檢測的影響因素和質量控制

流式細胞術在免疫學中有著廣泛的應用，其免疫熒光染色的標本制備非常重要，常常由于標本制備過程中出現人為非特異性熒光干擾(尤其在間接免疫熒光染色中)或細胞濃度低等影響檢測結果。