疑似人禽流感／不明原因肺炎病例標本核酸檢測

一、標本的采集

盡量采集下呼吸道標本，如下呼吸道吸取物和肺穿刺標本等。采集標本的溶液使用新開封的DMEM或者Hanks（PH7.0，過酸或過堿都會導致病毒的滅活，不利于病毒分離）液，標本采集之后要密封好。送往國家流感中心進行復核的病例標本采集之后直接送檢，如要分裝，在潔凈的BSL-2 生物安全柜內操作。

二、核酸的提取

疑似禽流感/不明原因肺炎核酸檢測各個實驗區域應盡量分開，如反應液配制區域、核酸提取區域和檢測區域最好分別位于獨立的房間內。如果不能做到各個實驗區域分開，實驗操作開始前應做好清理凈化工作：實驗區域的臺面先用清水擦拭一遍，再用蒸餾水擦拭一遍，最后用75%的醫用酒精擦拭一遍。核酸提取的生物安全柜臺面擦拭過后，紫外消毒20~30分鐘，然后開啟超凈臺的通風裝置，凈化至少10分鐘。

核酸提取和配制反應液使用的移液器應分開使用，并且做到專用，如不能分開使用，則實驗操作前用含有DNase和RNase的溶液擦拭，或者清水多次擦拭，去除核酸污染。核酸提取時，離心機、振蕩器等實驗儀器應位于同一區域內，避免來回走動產生氣溶膠。核酸提取過程中同時提取一個陰性對照作為參考。使用過的廢棄Tip頭應及時放入自封袋內，實驗結束后進行高壓滅菌。

三、核酸檢測反應體系的加樣

核酸檢測反應體系配制完畢后，先向反應液中加陰性對照，待所有陰性對照加樣完畢后再加待檢測標本的核酸，最后加陽性對照。使用過的廢棄Tip頭應及時放入自封袋內， 實驗結束后進行高壓滅菌。

四、PCR產物電泳

由于電泳過程是最容易造成氣溶膠污染的環節之一,電泳區域一定要同其它區域在物理上分開.，及時清理實驗廢棄物，凈化實驗工作臺面。

五、生物安全

無論是標本采集過程中還是實驗檢測過程中，所有工作人員要做好個人防護，佩戴N95口罩、帽子和無粉乳膠手套，穿防護服，避免實驗室感染的發生。