圖1. 大觀霉素系統適用性試驗溶液的HPLC-ELSD圖譜，1=氯化氫，2=放線菌胺，3=大觀霉素，4=（4S）-二氫大觀霉素，5=（4R）-二氫大觀霉素。
本文采用高效液相色譜-蒸發光散射檢測（HPLC-ELSD）法建立了測定大觀霉素及其有關物質（二氫大觀霉素、放線菌胺等）的質量控制方法。此方法具有專屬性強、靈敏度高、快速簡便的特點。
大觀霉素屬氨基糖苷類抗生素，與同類抗生素類似，具有極性強、無發色團、紫外檢測難的特點。并且結構中半縮酮不穩定，容易降解，從而使大觀霉素的含量分析較為困難。以下實驗建立了測定大觀霉素及其有關物質（二氫大觀霉素、放線菌胺等）的質量控制方法。
實驗部分
儀器與主要試劑
UM-3000蒸發光散射檢測器（通微(上海)分析技術有限公司）；TSK gel ODS-100V（150 mm×4.6 mm，5μm）色譜柱（日本東曹公司）；大觀霉素標準品（中國藥品生物制品檢定所）；鹽酸大觀霉素樣品曲必星（普強蘇州制藥有限公司）；甲醇（默克公司）；奧加諾純水機（奧加諾公司）。其他試劑為分析純。
色譜條件
色譜柱：TSK gel ODS-100V（150mm×4.6 mm，5μm）柱；柱溫：室溫；流動相：25 mmol/L 乙酸銨水溶液（含0.1%三氟醋酸（TFA）-甲醇體積比為88：12），等度洗脫，流速：0.6 ml/min；蒸發光散射檢測器參數：漂移管溫度50℃，載氣流速：2.5L/min。
樣品制備
稱取53mg大觀霉素標準品，溶于2ml無水甲醇中，冰水浴下，緩慢加入11.3mg硼氫化鈉，放置5h后加鹽酸調pH至3.0，最后用純凈水稀釋至100ml（該溶液含有放線菌胺、二氫大觀霉素等有關物質及少量未反應完的大觀霉素。）
稱取約1.18mg曲必星樣品，溶于2ml純凈水，備用。
結果
由于大觀霉素分子中含有三個羥基和兩個仲胺基，具有較強的極性。色譜柱的選擇方面采用TSKgel ODS-100V色譜柱，這是由于TSKgel ODS-100V 色譜柱采用極性封端技術，可以使用100%純水做流動相，較普通ODS柱更適合于分析極性物質。
在流動相的選擇方面，對包括乙酸銨的濃度，三氟醋酸的加入量，及甲醇的百分比等條件進行了優化。結果表明當水相TFA的含量為0.1%、乙酸銨的濃度25mmol/L、甲醇含量12%的條件下大觀霉素及相關雜質可以得到較好分離。在此優化的條件下，對系統適用性實驗溶液樣品和標準樣品溶液進行分析，HPLC-ELSD色譜圖分別見圖1和圖2。
圖2. 曲必星的HPLC-ELSD圖譜，1=氯化氫，2=大觀霉素。
另外，針對乙腈價格日益增加的現狀，本方法選用甲醇作有機相，較使用乙腈做流動相可以大大節省每次分析的成本。
結論
實驗結果表明：本文建立的高效液相色譜-蒸發光散射檢測（HPLC-ELSD）大觀霉素的質量控制方法具有專屬性強、靈敏度高、快速簡便的特點，可以滿足生產企業對大觀霉素原料、制劑中的大觀霉素質量控制的要求。