高效液相色譜法系采用高壓輸液泵將規定的流動相泵入裝有填充劑的色譜柱進行分離測定的色譜方法。注入進樣閥的供試品，由流動相帶入柱內，各成分在柱內被分離，并依次進入檢測器，由記錄儀、積分儀或數據處理系統記錄色譜信號。采用微柱液相色譜系統可以減少溶劑的消耗并達到快速分離之目的。
高效液相色譜法的主要分離機制有吸附、分配、離子交換和排阻作用。
1．對儀器的一般要求
所用的儀器為高效液相色譜儀。儀器應定期檢定并符合有關規定。
（1）色譜柱
最常用的色譜柱填充劑為化學鍵合硅膠。反相色譜系統使用非極性填充劑，以十八烷基硅烷鍵合硅膠最為常用，辛基硅烷鍵合硅膠和其他類型的硅烷鍵合硅膠（如氰基硅烷鍵合相和氨基硅烷鍵合相等）也有使用。正相色譜系統使用極性填充劑，常用的填充劑有硅膠等。離子交換填充劑用于離子交換色譜；凝膠或高分子微球等填充劑用于分子排阻色譜等；手性鍵合填充劑用于對映異構體的拆分分析。填充劑的性能（如載體的形狀、粒徑、孔徑、表面積、鍵合基團的表面覆蓋度、含碳量和鍵合類型等因素）以及色譜柱的填充，將直接影響待測物的保留行為和分離效果。孔徑在150?以下的填料適合于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物則應選擇孔徑在300?以上的填料。以硅膠為載體的鍵合固定相填充劑適用pH2～8的流動相。當pH大于8時，可使載體硅膠溶解；當pH小于2時，與硅膠相連的化學鍵合相易水解脫落。當色譜系統中需使用pH大于8的流動相時，應選用耐堿的填充劑，如采用高純硅膠為載體并具有高表面覆蓋度的鍵合硅膠、包覆聚合物填充劑、有機-無機雜化填充劑或非硅膠填充劑等；當需使用pH小于2的流動相時，應選用耐酸的填充劑，如具有大體積側鏈能產生空間位阻保護作用的二異丙基或二異丁基取代十八烷基硅烷鍵合硅膠、有機-無機雜化填充劑等。
（2）檢測器
最常用的檢測器為紫外吸收檢測器，其他常見的檢測器有二極管陣列檢測器（DAD）、熒光檢測器、示差折光檢測器、蒸發光散射檢測器、電化學檢測器和質譜檢測器等。紫外、二極管陣列、熒光、電化學檢測器為選擇性檢測器，其響應值不僅與待測物的質量有關，還與化合物的結構有關；示差折光檢測器和蒸發光散射檢測器為通用型檢測器，對所有的化合物結構均有響應；蒸發光散射檢測器屬質量型檢測器，對結構類似的化合物，其響應值幾乎僅與待測物的質量有關；二極管陣列檢測器可以同時記錄待測物在規定波長范圍內的吸收光譜，故可用于待測物的光譜管制和色譜峰純度的檢查。紫外、熒光、電化學和示差折光檢測器的響應值與待測物的質量呈線性關系，但蒸發光散射檢測器響應值與待測物的質量通常并不呈線性關系，必要時需對響應值進行數學轉換后進行計算。不同的檢測器，對流動相的要求不同。當采用紫外檢測器時，所用流動相應至少符合紫外分光光度法（附錄Ⅳ A）項下對溶劑的要求；采用低波長檢測時，還應考慮有機相中有機溶劑的截止使用波長，并選用色譜級有機溶劑。蒸發光散射檢測器和質譜檢測器通常不允許使用含不揮發鹽組分的流動相。
（3）流動相
由于C18鏈在水相環境中不易保持伸展狀態，故對于十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的反相色譜系統，流動相中有機溶劑的比例通常不應低于5％，否則C18鏈的隨機卷曲將導致組分保留值變化，造成色譜系統不穩定。
正文中各品種項下規定的條件除固定相種類、流動相組成、檢測器類型不得任意改變外，其余如色譜柱內徑、長度、固定相牌號、載體粒度、流動相流速、混合流動相各組成的比例、柱溫、進樣量、檢測器的靈敏度等，均可適當改變，以適應具體的色譜系統并達到系統適用性試驗的要求。但對某些品種，必須用特定牌號的填充劑方能滿足分離要求，可在該品種項下注明。