真核細胞的轉染實驗步驟

1.  在6孔板中接種1~3×105細胞/孔，加入2ml完全培養基，置CO2孵箱中37℃培養過夜。

2.  待細胞長到50-80%單層時，在無菌離心管中配制如下溶液：

i.  溶液A：將4?g待轉染的超純DNA稀釋到250?l無血清培養基中，靜置5min

ii.  溶液B：將2-25?l LipofectAMINE 稀釋到250?l無血清培養基中，靜置5min

3.  混合溶液A和B，輕輕混勻，室溫放置15-45min。

4.  用2ml無血清培養基輕輕洗滌細胞，加入0.8ml無血清培養基/孔，將脂質體復合物滴加到孔中，輕輕搖晃混勻，置CO2孵箱中37℃孵育2-24hr。

5.  用完全培養基替換轉染液，繼續培養。

6.  24-72hr后檢測蛋白質的表達或傳代并加入選擇性抗生素以篩選穩定表達株。