PCR技術

實驗方法原理 PCR是在模板DNA、引物和dNTPs的存在下依賴于DNA聚合酶的酶促反應。PCR技術的特異性取決于引物和模板結合的特異性。反應分為變性、退火、延伸三步，經過一定的循環，介于兩個引物之間的特異DNA片段得到大量擴增。

實驗材料 轉基因水稻葉片DNA引物

試劑、試劑盒 礦物油MgCl2PrimerdNTP水溴酚藍瓊脂糖凝膠EB

儀器、耗材 離心機電泳儀紫外檢測儀

實驗步驟

1.  調整模板濃度至10 ng/ml

2.  按下列體系配制反應混合液，混勻，加一滴礦物油，離心5秒

Template DNA        （20 ng）2 

buffer              2.0 ′10 μl

MgCl2（25 mM）        1.5 μl

lmPrimer F (10 mM)        0.2 μl

Primer R (10 mM)        0.2 μl

lmdNTPs（2 mM）        2.0 μl

Taq（5 U/μl）  2.0 μl

Add ddH2O  to    20 μl

3.  PCR反應循環條件設置：

95 ℃                     1 cycle

94 ℃   55 ℃  1'   72 ℃  1'30"   35 cycles

72 ℃                    1 cycle

4 ℃                       forever

溴酚藍，混勻，短暫離心，取15 ml

4.  檢測：加2 ml反應產物點樣電泳；

5.  在1%的瓊脂糖凝膠上點樣電泳；EB染色，紫外觀察。