STR是什么意思?
STR(Short Tandem Repeats,短串聯重復序列)分析已被國際細胞系鑒定協會(ICLAC:International Cell Line Authentication Committee )、ATCC、NIST(美國國家標準局)等權威機構作為金標準應用于細胞鑒定。由于目前使用錯誤細胞情況非常嚴重,越來越多的雜志要求在投稿時提供細胞STR鑒定報告。
今天就來分享STR的鑒定報告如何解讀?
1.STR檢測流程
首先了解下STR檢測流程,先提取細胞DNA, 然后進行PCR擴增及測序,最后進行結果分析。詳細檢測流程請看下圖:
▲圖1 STR檢測流程
* Dr.Cell 采用的細胞STR鑒定方法完全符合美國國家標準局(NIST)頒布的細胞鑒定標準-ANSI/ATCC ASN-0002-2011, 并且在中國CMA認證與司法鑒定許可的實驗室進行檢測。
2.STR位點基因分型結果
完整的細胞STR檢測報告請查閱(STR Report-Sample),報告上會列出受檢細胞系STR基因分型結果附表(圖2),表格中將列出所有實際檢測位點信息。第2列“Sample”為樣本檢測得到的STR位點信息, 該結果是根據實際PCR擴增后檢測到的片段長度得到的數據信息。第3列為ATCC、DSMZ等數據庫中標準細胞STR位點信息。數據庫中常規提供9個位點信息,即 Amelogenin, CSF1PO, D13S317, D16S539, D5S818, D7S820, THO1, TPOX, vWA。
▲圖2 STR基因分型結果
STR位點基因分型結果峰圖:
在報告中會給出受檢細胞系的STR檢測結果峰圖(圖3),該峰圖是實際PCR擴增后檢測到的片段長度和分型信息。位點信息與表1(圖2)相同。
▲圖3 STR基因分型結果峰圖
*STR: 短串聯重復序列(short tandem repeats,STR)也稱微衛星DNA(microsatellite DNA), 通常是基因組中由1~6個堿基單元組成的一段DNA重復序列,由于核心單位重復數目在個體間呈高度變異性并且數量豐富,構成了STR基因座的遺傳多態性。
▲圖4 STR 短串聯重復序列
* 純合子:Homozygote,指同源染色體在同一基因位點上的兩個等位基因相同。即顯示單個峰。
* 雜合子:Heterozygote,指同源染色體在同一基因位點上的兩個等位基因不相同。即顯示2個峰。
▲圖5 STR位點峰圖
人源正常組織細胞其STR圖譜,一個基因位點僅出現一個或2個峰(更多信息請查閱短串聯重復序列 (STR, short tandem repeats) )。如發生細胞交叉污染現象,基因位點會出現多等位基因,即一個基因位點出現3或4個峰(圖6)。當然,也不能排除可能為三倍體等多倍體突變現象。
▲圖6 多等位基因峰圖
3.STR位點基因分型結果比對
根據鑒定得到的細胞STR位點信息在ATCC、DSMZ等數據庫中進行比對,進入ATCC STR數據庫頁面(https://www.atcc.org/en/STR_Database.aspx )輸入檢測細胞的9個STR位點信息,與ATCC數據庫進行對比。
▲圖7 ATCC 數據庫比對
輸入信息后給出比對結果(圖8)
▲圖8 ATCC數據庫比對結果
同樣在DMSZ數據庫進行數據比對,得到匹配結果。
▲圖9 DSMZ數據庫比對結果
比對結果中"%Match"(ATCC, 圖8)及 "EV" (DSMZ, 圖9)列是受檢細胞的9個STR位點基因分型數據與數據庫中細胞的匹配度。
人源細胞STR鑒定結果判定標準:
受檢細胞STR位點的基因分型數據與其對應的標準細胞系(其原始組織或衍生細胞系)STR基因分型數據進行比對:
1)若兩者的匹配度≥80%,則判定受檢細胞系為標準細胞系或為標準細胞系的衍生細胞系。
2)若兩者的匹配度在56%-80%之間,建議結合細胞系形態、細胞系特異性標記物等輔助分析進行綜合判斷。
3)若兩者的匹配度≤56%,則判定受檢細胞樣本與其對應的標準細胞系不相關。