二、建立細胞系(或株)的要求
關于什么樣的體外培養細胞群,可被確認為是已被鑒定的細胞(Certified Cells),國際上也尚無統一的規定,一般依具體情況而定。在只用作初代培養細胞,只要供體性別、年齡等均一,取材部位及組織種類等條件穩定,做鑒定的項目無需很多,有幾項能說明細胞的相關性狀的即可。如能長期保存并可供其它研究室使用,特別是做反復傳代的細胞,習慣上有以下一些要求,并在刊物上報道時應加以說明。
(-)組織來源
應說明細胞供體所屬物種,來自人體,動物或其它;供體的年齡、性別、取材的器官或組織;如系腫瘤組織,應說明臨床病理診斷,組織來源,以及病例號等。
(二)細胞生物學檢測
應了解細胞一般和特殊的生物學性狀,如細胞的一般形態、特異結構、細胞生長曲線和分裂指數、倍增時間、接種率;特異性,如為腺細胞有否特殊產物包括分泌蛋白或激素等;如為腫瘤細胞,應力求證明細胞確系來源于原腫瘤組織而非其它,并仍保持性性,為此需做軟瓊脂培養、異體動物接種致瘤性和對正常組織浸潤力等實驗。
(三)培養條件和方法
各種細胞都有自己比較適應的生存環境,因此應指明使用的培養基、血清種類、用量以及細胞生存的適宜pH等。
三、已建立細胞系或株的鑒定、管理和使用
近些年,當一個細胞系或細胞林建成后,我國常通過組織專家開鑒定會的形式予以鑒定,從學術角度考慮,此舉實非必要。按國際慣例,只要研究認真負責地把有關資料在雜志或刊物上報道,詳細介紹上述各項目即可。
以前因未建立統一的細胞庫時,對已建立的細胞系(株)多由作者單位自行保管,有浪費人力、交流使用不便、細胞易污染和丟失等弊病。我國已初建成小規模貯存細胞機構,待獲進一步發展,這對我國細胞培養必將有更大促進作用。
國際上美、英和日本等國已建有細胞庫;美國已有美國標準細胞庫或細胞銀行(ATCC)和人遺傳突變細胞庫(HGMR)、細胞衰老細胞庫(CAR)等,其中 ATCC不僅是美國也世界最大的細胞庫。ATCC下屬有一組協作實驗室和一個由眾多專家組成的咨詢委員會。ATCC也是美國國立癌癥研究所(NCI)和美國衛生研究所中(NIH)的資源庫,尤與NCI有密切的關系。ATCC也是世界衛生組織WHO的國際培養細胞文獻中心。ATCC現液氮凍存有3200個已經過鑒定的細胞系(1992),其中包括來自正常人和各種疾病患者的皮膚成纖維細胞系;和來自不同物種的近75個雜交瘤細胞株。ATCC接納來自世界各國已經鑒定的細胞予以貯存,同時也向世界各國的研究者或實驗室免費提供研究用細胞(做盈利性研究時收費。) ATCC接納入庫細胞時,必須符合其入庫標準, ATCC入庫細胞要求檢測項目如下:
培養簡歷:組織來源日期、物種、組織起源、性別、年齡、供體正常或異常健康狀態、細胞已傳代數等
凍 存 液:培養基和防凍液名稱
細胞活力:融解前后細胞接種存活率和生長特性
培 養 液:培養基種類和名稱(一般要求不含抗生素)、血清來源和含量
細胞形態:類型,如為上皮或成纖維細胞等,融解后細胞生長特性
核 型:二倍體或多倍體,標記染色體的有無
無污染檢測:包括細菌、真菌、支原體、原蟲和病毒等
物種檢測:檢測同工酶,主要為G6PD和 LDH,以證明細胞有否交叉污染以及反轉錄酶檢測
免疫檢測:一兩種血清學檢測
細胞建立者:建立者姓名;檢測者姓名
以上為ATCC入庫基本要求,雜交瘤入庫標準尚有所不同,詳細情況請參閱ATCC的“Catalogue of Cell Lines and Hybridomas”。