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  • 發布時間:2020-09-01 11:49 原文鏈接: 實驗動物染毒途徑和技術1

    <(一)經口(胃腸道)染毒>


    在毒理學試驗中染毒途徑的選擇,應盡可能模擬人在接觸該受試物的方式。最常用的染毒途徑為經口、經呼吸道;經皮及注射途徑。染毒的途徑和方法根據實驗目的、實驗動物種類和藥物劑型等情況確定。不同途徑的吸收速率,一般是靜脈注射>吸入>肌內注射>腹腔注射>皮下注射>經口>皮內注射>其他途徑(如經皮等)
    (一)經口(胃腸道)染毒

    常用有喂飼、灌胃和吞咽膠囊等方式。

    1.喂飼 將受試物摻人動物飼料或飲水中供實驗動物自行攝人。如果受試物是完全無毒的,則在飼料中的最高含量可為5%,一些有營養價值的食物成分物質則可更高,但應注意不要造成飼料營養成分失衡而影響實驗動物的生長發育。喂飼法符合人類接觸受試物的實際情況,但缺點多,如適口性差的受試物,實驗動物拒食;易揮發或易水解的受試物不適用。而且,實驗動物應單籠喂飼,以食物消耗量計算其實際染毒劑量。

    2.灌胃 將受試物配制成溶液或混懸液,以注射器經導管注入胃內。一般灌胃深度從口至劍突下。最好是利用等容量灌胃法,即受試物配制成不同濃度,實驗動物單位體重的灌胃容量相同。外源化學物用溶劑稀釋,一般講濃溶液比稀溶液毒性大,但是也有的外源化學物稀釋之后毒性反而增加,即存在所謂“稀釋毒性”,其原因尚不清楚。因此在發現有稀釋毒性時等濃度灌胃法也可接受。灌胃前應禁食空腹,大鼠隔夜禁食,小鼠可禁食4h(因小鼠消化吸收和代謝速度較快),均不停飲水。灌胃后2—4h提供飼料。經口多次染毒,一般不禁食,但應每日定時染毒。灌胃法適用小鼠、大鼠、兔、犬等動物,優點是劑量準確,缺點是工作量大,并有傷及食管或誤入氣管的可能。

    (1)小鼠灌胃法;左手拇指和食指捏住小鼠頭部兩耳后皮膚,無名指或小指將尾部緊壓在手上,使小鼠腹部向上。右手持灌胃管(1~2ml注射器上連接以14號注射針頭,尖端磨鈍,稍加彎曲的灌胃管),灌胃管長4~5cm,直徑約lmm。操作時,經口角將灌胃管插人口腔,用胃管輕壓小鼠頭部,使口腔和食管成一直線,再將胃管沿上腭壁輕輕插入食管內,當推進約2~3cm左右時,灌胃管前端約到達膈肌水平(體重20g左右的小鼠),此時可稍感有抵抗。如此時動物無呼吸異常,即可將藥注入。如遇阻力或動物憋氣則應抽出重插管。如誤插入氣管注藥時可引起動物立即死亡。藥液注完后輕輕退出胃管。操作時宜輕柔,以防損傷食管及膈肌。

    (2)大鼠灌胃法:灌胃法與小鼠相似。采用的灌胃管長約6~8cra,直徑約為1.2mm,尖端磨鈍。插管時,為防止插人氣管,應先抽回注射器針栓,無空氣抽回說明不在氣管內,即可注藥。

    (3)犬和家兔灌胃法:由2人操作,將犬關人特制犬籠,并移動活動柵,擠犬并使之固定,持犬者兩手握住犬耳后及頸部皮膚,使犬頭部朝上頸部拉直。灌胃者用一木棍讓犬咬住,將硬質胃管自木棍與上腭之間插入食管,約20cm左右即下達到胃腔(插入深度可預先在體外測量好,并做好記號);持兔者端坐兩腿夾住兔軀干及其后肢,兩手握住兔耳及前肢,將兔頭朝上,使兔頸部拉直。灌胃者用開口器通過兔口角(在犬齒后)之空隙,將開口器向下轉動數次,使兔舌伸出。開口器的孔應放置在口腔正中央,將硬質胃管通過開口器小孔插入食管,約10-15cm左右即下達到胃腔。如胃管進人胃內,動物較安靜,無掙扎、氣促等表現,應先抽回注射器針栓,無空氣抽回說明不在氣管內,即可用注射器推入藥液,再推入2~3mi水,以送人留滯在胃管內的藥液,灌胃完畢,迅速抽出胃管,然后取出木棍或開口器。

    3.吞咽膠囊 將一定劑量的受試物裝入膠囊中,放至犬的舌后部,迫使動物咽下,此法劑量準確,適用于易揮發、易水解和有異味的受試物。

    <(二)經呼吸道染毒>


    經呼吸道染毒可分為吸入染毒和氣管內注入。
    1.靜式吸人染毒 將一定數量的嚙齒類動物放在密閉的染毒柜中,加人易揮發的液態受試物或氣態受試物使成一定濃度。靜式吸入染毒簡易,但缺點較多,主要是隨試驗進行氧分壓降低(因此,實驗動物數量有限制),柜內受試物濃度也逐漸下降(由于動物吸人消耗、為被毛及染毒柜壁吸附所致),而且實驗動物有經皮吸收的可能。染毒時間一般為2h。要求受試物在lOmin內蒸發完畢。

    柜頂蓋部有三個附件。一個是投藥孔,在孔下方用多層紗布或濾紙作為接受和蒸發液態受試物的藥物蒸發器;一個是用于混勻蒸氣或氣體的小電扇;一個是插人溫度計的孔。在柜的下部的1/4處還留有一個供采樣的孔。

    靜式吸人染毒時應根據染毒柜容積和染毒時間,確定放置的實驗動物數,以保證動物的最低需氣量(表1—4)。染毒柜所需容積也可按實驗動物總體重(kg)×100×染毒時間h)來估算,相當于動物每kg體重每小時所需空氣體積為100L。

    靜式吸入染毒多以計算方法得到染毒柜內受試物濃度,受試物濃度以mg/m.易揮發液體化學物計算公式為

    C=(a·d·l000)/L

    式中:C=設計的染毒濃度(mg億);a=加入受試物的量(m1);L:染毒柜容積(L)。

    氣態化學物加入為m1數,可依據染毒柜容積折算為ppm。單位mg/ml:

    記算公式為(式中MW為受試物的分子量):mg/m3=(MW·ppm)/22.4

    可在染毒期內測定受試物濃度2~3次,以其均值作為實際染毒濃度。

    表1—4 實驗動物的最低需氣量及不同染毒柜容積應放置的動物數(染毒2h)


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