1范圍
本規范規定了哺乳動物骨髓嗜多染紅細胞微核試驗的基本原則、要求和方法。
本規范適用于化妝品原料的染色體畸變檢測。
2規范性引用文件
GB 14924實驗動物與飼料標準
OECD Guidelines for Testing of Chemicals(No.481,Adopted:21,July 1997)
3定義
微核 (Micronucleus):染色單體或染色體的無著絲點斷片,或因紡錘體受損而丟失的整個染色體,在細胞分裂后期,仍然遺留在細胞質中。末期之后,單獨形成一個或幾個規則的次核,被包含在子細胞的胞質內,因比主核小,故稱為微核。
4原理
凡能使染色體發生斷裂或使染色體和紡錘體聯結損傷的化學物,都可用微核試驗來檢測。各種類型的骨髓細胞都可形成微核,但有核細胞的胞質少,微核與正常核葉及核的突起難以鑒別。嗜多染紅細胞是分裂后期的紅細胞由幼年發展為成熟紅細胞的一個階段,此時紅細胞的主核已排出,因胞質內含有核糖體,姬姆薩染色呈灰藍色,成熟紅細胞的核糖體已消失,被染成淡桔紅色。骨髓中嗜多染紅細胞數量充足,微核容易辨認,而且微核自發率低,因此,骨髓中嗜多染紅細胞成為微核試驗的首選細胞群。
5 試驗的基本原則
通過適當的途徑使動物接觸受試物,一定時間后處死動物,取出骨髓,制備涂片,經固定、染色,在顯微鏡下計數含微核的嗜多染紅細胞。
6 儀器和器械
生物顯微鏡、解剖剪、鑷子、止血鉗、注射器、灌胃針頭、載玻片、蓋玻片(24mm×50mm)、塑料吸瓶、紗布、濾紙等。
7 試劑
7.1小牛血清(滅活)
將濾菌的小牛血清置于56℃恒溫水浴保溫30min滅活。滅活的小牛血清通常保存于冰箱冷凍室里。
7.2姬姆薩(Giemsa)染液
成分:Giemsa染料 3.8g
甲醇 375mL
甘油 125mL
配制:將染料和少量甲醇于乳缽里仔細研磨,再加入甲醇至375mL和甘油,混合均勻,放置37℃恒溫箱中保溫48h。保溫期間,振搖數次,促使染料的充分溶解,取出過濾,兩周后用。