細胞器的光鏡觀察(2)

(三)方法

1. 動物細胞骨架的顯示方法

（1）無菌條件下，在25 ml 培養瓶中放入清潔無菌的蓋玻條，然后接種3 ml左右的細胞懸液，蓋緊瓶塞，37℃恒溫箱內培養24小時。

(2) 取出蓋玻片條，浸入裝有6mmol磷酸緩沖液的小瓶中5～10分鐘。

(3) 用吸管吸棄6mmol/l磷酸緩沖液，加入2% triton，x-100液，蓋緊瓶塞，置37℃恒溫箱中處理20~30分鐘。

(4) 用吸管吸棄triton，x-100液，加入m-緩沖液，輕輕洗涂細胞3次，每次3分鐘。

(5) 用吸管吸棄m-緩沖液，加入3%戊二醛溶液。固定8～10分鐘。

(6) 吸棄固定液，用6mmol/l磷酸緩沖液反復沖洗3次，每次10分鐘。

(7) 取出蓋玻片條，放在小培養皿中，加入0.2%考馬斯亮藍染液數滴，染色30分鐘以上。

(8) 用蒸餾水沖洗玻片，空氣干燥。

(9) 觀察：光鏡下可見細胞中分布著許多被染成藍色的網絡狀結構，此即細胞骨架。

圖 3-1 細胞骨架

圖3-2光鏡下高爾基復合體

三、永久制片標本的觀察

由于不同的細胞器需用不同的染色方法才能顯示出來，故要在不同的標本中觀察。

（一）高爾基復合體

電鏡下所見的高爾基復合體是由小囊泡、扁平囊泡、大囊泡三部分組成，但在光鏡下所見的卻與此截然不同，呈點狀或螺旋狀。

觀察麻雀小腦、兔或貓的脊神經節切片標本，低倍鏡下觀察，可見到許多大小不等、被染成黃色的圓形神經節細胞，該細胞中央有一不著色呈空泡狀的圓形細胞核可作為該細胞的標志。選擇神經節細胞較多的部位，轉換高倍鏡或油鏡仔細觀察，可清晰看到細胞中央圓形、空泡狀細胞核，有的核內可見1~2個發亮的呈淡黃色的核仁。細胞質中散在許多棕黑色顆粒狀或短線狀的結構，就是高爾基復合體。高爾基復合體在細胞內的位置一般集中于細胞核外的某一區域，但在鏡下所見的神經節細胞中高爾基復合體卻多半圍繞在整個細胞的周圍。在視野中也可以看到沒有經過核的切面，該細胞內高爾基復合體就好象散在整個細胞中。
（二）線粒體

1. 將蟾蜍腎臟切片置于低倍鏡下觀察，視野中可見到許多圓形或橢圓形的中腎小管橫切面，每一中腎小管的中央為管腔，管壁由緊密排列的單層上皮細胞組成，管壁細胞之間界限不甚清楚，但可根據核的位置大致確定細胞的范圍。轉換高倍鏡或油鏡觀察，可見細胞核呈圓形，淺藍色，內有一深染的核仁，核周圍的細胞質中有許多藍黑色顆粒或線狀的結構，即為線粒體。

2. 在蛙肝臟組織的玻片標本上，橫切面呈三角形和深藍色。首先在低倍鏡下找到蛙的肝臟組織的橫切面，調清視野，然后轉換到高倍鏡或油鏡觀察。可以看到細胞的界限不太清楚，細胞中央不著色的部位或淺染區是細胞核，內有1個或多個核仁。在細胞核周圍的細胞質中有許多染成深藍色的線狀、短棒狀或顆粒狀的結構，這就是線粒體。

（三）中心粒

觀察馬蛔蟲的子宮橫切片。在低倍鏡下觀察，可以看到宮腔內有許多處于不同分裂時期的受精卵，外圍有一層厚的受精膜（注意不要誤以為受精卵的細胞膜），膜內為大的圍卵腔。尋找其受精卵處于有絲分裂中期的細胞，然后換高倍鏡觀察。可在細胞兩極看到明顯的中心體。每個中心體含有一個被染成深藍色的小粒，稱為中心粒，在中心粒周圍有一團較致密的物質，稱為中心球，中心粒和中心球合稱中心體。在中心體的外圍隱約可見放射狀的星射線。兩個中心粒之間絲狀的結構，稱紡錘體。

圖 3-1 脊神經節細胞高爾基體 圖3-2 腎小管上皮細胞線粒體
1.高爾基體 2.細胞核 3.細胞膜 1.腎小管 2.細胞核 3.核仁 4.線粒體
圖3-3 馬蛔蟲受精卵細胞分裂中期（示中心體）
上 光鏡圖； 下 電鏡圖
1.中心體 2.卵膜 3.染色體 4.圍卵腔